ips分化

sizhengliu

新手请教各位一个问题：我想诱导体细胞成ips，然后再向特定方向分化，我需要选择哪种诱导方式（慢病毒、腺病毒、mRNA···）更为可行？哪位前辈有这些方式的比较资料？多谢！

sizhengliu

可以分享自己的资料吗？自己顶··

刘森泉

小鼠iPS重编程（逆转录）3 U1 T6 \  n/ W& `& C
, ^' t0 \& N  @" S! F  F, W& d, t
1.        ①4份293T细胞，80%，10ml培养基；
1 F, F( [7 _* S* S- K8 T* T8 A②复苏一株2代MEF；: O- \) Q) K* c  G! `" F
2.        ①半量换液，培养1h；/ U0 g+ s0 w" {6 n
②4份病毒：因子15ug、GP15ug、G4ug、TE（437-V）、CaCl263ul、2XHBS500ul，0.5h后加入293T细胞；4 h1 b8 F, ^% {3 k& b
③用0.1%明胶处理一块六孔板，2个孔；4 g" Z3 `$ Q, n- {
④6h后换成5ml新鲜293T培养基，加50ul sodium butyrate；* ~# y2 E( v% y$ o6 X6 [+ |
3.        ①六孔板明胶孔用D-PBS洗3次；
+ \' L$ B2 x% S②MEF转移到明胶处理的孔里，准备转染；/ p" X6 u: r& j" F1 ^" x8 a
4.        每盘收1.5ml病毒（其余继续培养），混合后过滤，加4ml至MEF中，再加4ul polybrene，6h后换新鲜MEF培养基；
' _, M9 [( x6 K: s5.        收集其余病毒混合过滤添加，再加4ul polybrene，6h后换新鲜MEF培养基，新鲜培养基中加VC和VPA（2uM）；. V+ D; N* h; r3 x
6.        mitomycin C-7ug/ml处理基质细胞2h，D-PBS洗4次，将转然后的MEF转移至基质细胞上。换mES培养基，加VC和VPA；- \% Y- }  n& y" j) p& b2 T2 _
7.        每天换液。. L  j( V8 [/ q0 d

刘森泉

你做什么方面的分化啊？要人的还是小鼠的iPS，上面的protocol仅作参考，希望可以帮到你。