细胞复苏

huangcong1988

之前冻存的293T，复苏了好几次，都不行，就是在复苏12h之后，细胞仍然没有贴壁，我想可能是冻存液中DMSO的影响，因为之前我复苏都是直接融了后加培养基的，所以我想试一下，融了后先离心，去掉上清，可能这样效果会好一点，那融了以后，DMSO在常温下不是对细胞有很大影响吗？我想问一下，那在多大离心速度的情况下，离多长时间呢？谢谢

hygene

冻存液中DMSO在常温下对细胞的影响确实很大的，对某些特别敏感的细胞最好是解冻后立即离心去除DMSO，离心转速一般1000-1500rpm,5分钟

fananran2003

水平离心机，1000转，10min，不要超过1800，否则细胞死亡严重。

huangcong1988

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1000转是什么意思呢？是1000rpm呢还是1000g呢？还有水平离心是怎么回事呢？

huangcong1988

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谢谢

fananran2003

1000rpm，就是水平转子的离心机，不要转子是角度倾斜的离心机，

sizhengliu

我们一般是1000rpm，6-8分钟

yylhxylong

融化后转到10ml 离心管中，加入2-3ml的media，mix 然后1000 rpm 离心5分钟，去除上清，在稀释到需要的浓度~

yangpan521

如果冻存时DMSO的浓度为10%，那么在解冻细胞后，不需要离心将解冻细胞的细胞加培养基稀释，将DMSO浓度降到1% ，对细胞是无影响的