求方法：小鼠或人的精子和卵母细胞的染色体核型分析

hcluo

求方法：小鼠或人的精子和卵母细胞的染色体核型分析，最好能提供一下详细的步骤或者参考文献。
# X" Y$ Z. S4 e7 C2 X. `
- F8 C" d; A  m" B0 F感谢啊！
- {# H  [  `* S5 }. w- t9 w4 }8 S6 z2 P1 B* x  |2 @- S) e
哪位能指导一下，不胜感激啊！

liluli0715

本人目前也在做MSC的核型分析，大家一起交流。具体步骤：实验过程：
7 w& M8 D" n; [+ V8 U3 G% ~- D  Z2 {当细胞处于对数期时接秋水仙素到培养瓶中终浓度0.2ug/ml，孵育4h；
- U. c' h  Q: \* B: d% r/ y收集细胞：0.25%胰酶消化，137g，1500rpm离心5min；2 P/ S+ c- c! T" F; w
低渗透：细胞沉淀用0.075MKCl重悬，再补足至5ml，用枪头轻轻吹打，37度水浴孵育20min；
+ e" v, C+ b1 x$ b7 a2 q预固定：加200ul新配固定液（甲醇：冰醋酸 3:1
8 _5 M0 Z$ v3 Z）- h# l' T" ]- j: Q2 f* j* U2 N3 q
137g，1500rpm离心5min；: L, U; f: }% D) ?( y
固定：细胞沉淀用新配的固定液重悬，过夜固定；# J1 m1 A/ Z- [3 _- f) ^
重复固定：137g，1500rpm离心5min，重复固定两次；8 `3 p( \+ F% s2 ^7 y6 C" Y& b
90度水温，蒸汽熏蒸30s；) D& U8 o1 s* N7 X
火焰上固定5s，吉姆萨染液染色；! l2 B5 W7 i& G+ G; n
镜检。
% F( p! m+ q$ q5 u0 q3 Z9 k1 A- T' H# w6 p+ R
此外，做核型所用的载玻片最好是冰片，其它具体细节还要靠自己摸索的，比如滴片的高度等

jhu132llh

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