离心后重悬问题

不苦的药

采用全骨髓贴壁法提取骨髓间充质干系包，遇到几个问题3 Z2 T' z; T: n% b; Z- h" H
1 冲出骨髓直接离心后进行重悬，一般吹打多少次比较好呢？
" n6 C, O, T% |8 L* J; |+ ]; p/ ]2 接种后我的细胞有地方很挤形成一个个大集落，而有的地方没有细胞，分布很不均匀，是不是与重悬有关呢？
  `0 y$ ^$ m0 l6 a% e3 一般传代时重悬细胞吹打多少次比较好呢？
' ^: g% V8 H4 ^4 h: F( T% H- @$ F希望大家谈谈自己的看法，谢谢。

luoziwei

吹打多少次？这个跟手法有关啊，一般要温柔的轻轻吹打，不能太猛了，否则有很多细胞团块的。我轻轻的吹，一般要20次左右。

zhuzhoujie24

请问楼主离心多少转每分钟？组织块能去干净不？

不苦的药

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# ?" k2 H' n3 p2 Z) v0 \, E
" W7 L* F) ^: \' l9 }( o3 a1500转

wangzhiqi86

吹打次数并没有明确的界限，因为每个人的手法不一样，力度也不一样，只要保证对细胞没有很大伤害的情况下，吹匀就可以了。你说的克隆生长应该是指原代细胞，这是正常的，因为那么多的单核细胞里面才有一个MSC，当然只会在某个地方呈集落生长

飞翔的十字架

我个人认为不需要离心，因为我不觉得通过这一步的离心能纯化细胞；0 L9 W; d" G2 a  C" v( N" \
我是用注射器针头进行吹打的，可以有效的去除碎骨等杂志，同时也不存在细胞团块

不苦的药

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用注射器针头进行吹打为什么有效的去除碎骨等杂志？和用枪头吹打有啥区别

飞翔的十字架

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% H# [3 N0 r! e* ?7 x. A回复 不苦的药 的帖子3 l% D+ L/ W/ Q$ ^, _. J" _
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我一般用2ml或5ml的注射器，针头足够小，碎骨等杂志是吸不进去的，而且只有理论上能吹打成单细胞

SunYouLa

吹打的时候要轻慢，吹打要均匀，差不多15到20次吧( I* h5 f2 W1 N% ~# c# X: d5 d
离心一般1000r/min 5min或者1200r/min 3min     ; M3 V0 X1 t, e1 C
接种的时候 一定要晃匀的哦！% z* x3 U  q; {, j: e

zhpeng07

你用什么吹，培养基？PBS?生理盐水？建议用培养基，基础培养基就可以。用注射器吹可以观察到骨的变化，吹几次后发白。原代的细胞一簇一簇是正常的，传代后要摇匀，放平，就回长满瓶底了。