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[讨论] 关于胎牛血清灭活的问题   [复制链接]

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包包
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楼主
发表于 2011-12-12 13:33 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
请教:GIBCO胎牛血清是否需要灭活?养哪种细胞需要灭活?养哪些细胞不需要灭活?灭活的操作方法,温度,等,求详解!灭活起什么作用??灭活的原理是?
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沙发
发表于 2011-12-12 14:23 |只看该作者
一般的血清都是要灭活的,56度,水浴30min,目的主要是灭活其中的补体,减少其细胞毒作用。临床用细胞最好灭活。
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藤椅
发表于 2011-12-12 15:03 |只看该作者
热灭活目的是为了去除血清中补体等对热敏感的物质,在对补体灭活以外,还可去除血清中的支原体的污染。常规灭活建议的温度在45℃到62℃之间,而时间则从15分钟到60分钟不等,其中最常用的就是56℃热处理30分钟。现在好像不主张热灭活,热灭活经常给血清产品带来负面影响,对血清的加热经常导致血清中沉淀的产生,此外,有研究结果证实热灭活步骤减弱了胎牛血清和小牛血清对细胞的促粘附作用。
# ?6 H( j! x; ^  a3 ?3 V处理步骤① 选用与血清瓶同规格的对照瓶一个。②对照瓶内放入与血清等体积的水。③ 温度预试④ 血清灭活:血清瓶与带温度计的对照瓶一齐放入水浴箱中,待温度计所示温度上升至56℃时, 定时30分钟。 ⑥ 大瓶血清灭活后,进行分装,在-20到-70℃保存。
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板凳
发表于 2011-12-12 15:04 |只看该作者
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热灭活在56℃水浴30min)
1 |3 [. w" ]+ u4 S* _- t! b–热灭活一些可以产生免疫应答反应的物质(补体等), J; @0 A9 ~3 Z8 P0 e  x
–在昆虫细胞培养和胚胎干细胞培养中需要

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报纸
发表于 2011-12-12 15:07 |只看该作者
加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件,刺激平滑肌收缩,细胞和血小板释放组胺,激活淋巴细胞和巨噬细胞。在免疫学研究,培养ES细胞,昆虫细胞和平滑肌细胞时,推荐使用热灭活血清。
2 V: t' M8 E5 c* }# X0 a实验显示,经过正确处理的热灭活血清,对大多数的细胞而言是不需要的。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进,或完全没有任何作用,甚至通常因为高温处理影响了血清的质量,而造成细胞生长速率的降低。而经过热处理的血清,沉淀物的形成会显著的增多,这些沉淀物在倒置显微镜下观察,像是“小黑点”,常常会让研究者误以为是血清遭受污染,而把血清放在37℃环境中,又会使此沉淀物更增多,使研究者误认为是微生物的分裂扩增。因此我建议您,若非必须,您可以不需要做热处理这一步。如此一来,不但节省您宝贵的时间,更确保血清的质量!
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地板
发表于 2011-12-12 15:36 |只看该作者
小牛血清是要灭活,胎牛血清好像不需要灭活吧。胎牛尚未出生,并没有补体成分。
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发表于 2011-12-12 16:32 |只看该作者
热灭活:在56℃水浴30min

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发表于 2011-12-12 16:34 |只看该作者
在前些年,大家都是用灭火的血清,才用热灭火
  l( [& D3 K, h4 D' I( ~热灭活:在56℃水浴30min8 \# L4 S; L. F4 V
但是最近很多实验室都不再灭火,我们这就用人不用灭火,细胞照样长得嗖嗖的,甚至比灭火的长得好,这个就得看各自实验室的老板怎么想了
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发表于 2011-12-12 16:34 |只看该作者
在前些年,大家都是用灭火的血清,才用热灭火: J, G  {: w' S" _6 u4 {
热灭活:在56℃水浴30min1 j+ L. I4 i9 E0 w; W3 l
但是最近很多实验室都不再灭火,我们这就用人不用灭火,细胞照样长得嗖嗖的,甚至比灭火的长得好,这个就得看各自实验室的老板怎么想了

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发表于 2011-12-12 16:37 |只看该作者
一直使用GIBCO胎牛血清,不需要灭活。
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