请教：MEF细胞的密度问题

momocy

求教有经验的解答：MEF细胞铺完要用的时候密度是多少比较合适？覆盖率要达到多少？是要把皿底全部覆盖住吗？克隆是在MEF的上面长么？还是在MEF的空隙里长？iPS诱导的时候MEF的密度对诱导影响大吗？

king8

MEF以10 6密度接种效果不错，覆盖率应达到90%以上，还有培养的克隆是长在滋养层上面的，个人感觉培养克隆的时候MEF的密度对其影响是比较大的。

inno

MEF经过丝裂霉素C处理后是feeder，ips生长在feeeder上面。) \! }' s" D6 N+ G0 H! T& l; W

5 W* i/ t( L  Q4 B. o/ D1 rips状态跟feeder还是有很大影响的，一般覆盖度达到90%以上。太稀克隆会分化，太密影响生长。

wangyimei

饲养层细胞用的时候密度标准是30000/平方厘米，这个密度是指贴下去成活的细胞的数目，所以种细胞的时候还是要比这个密度稍大一些为宜；刚种完的话，第二天看细胞感觉应该是融合至50%的样子，第三天用的时候细胞不会增殖，但是会进一步铺展拉伸；ES细胞或是ips细胞是长在MEF细胞的空隙中中的，而不是其上，ips细胞诱导时的MEF的密度还是很关键的，你用这个MEF之前要先养ES养个一段时间，检测一下对ES细胞的生长有没有影响，要是能很好的支持ES的生长，则可用这个作为诱导ips细胞的MEF. I0 a7 t- I4 d* U4 K
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$ N5 {* E: ]5 ?7 i; J' z; g
补充内容 (2011-12-16 13:15):
, ?8 R9 B. b  \6 s  p! G% K1 y( |我说的这个密度是指人的IPS细胞或ES的

houbara

30-40k per cm2

千细胞

看你用的什么种属来源的小鼠分离制备feeder，一般而言和楼上说的30K PER CM2比较合适；如果特殊来源的，可能要缩小数值，数量级不需要变化；+ N2 P* {6 p( B2 A/ ?5 l5 V
ips获得过程中你可以补加feeder或者CM都是可以解决问题的

song58

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song58

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yalech

come to study

snokey

不知道各位在MEF用了7-8后怎么补MEF的？我是直接往培养皿里加MEF。