BMSC的消化问题

天山飞鹤

用0.25%胰酶+0.02%EDTA消化5min，贴壁的细胞很难消化下来，而且对细胞伤害很大。改用0.125%胰酶+0.01%EDTA,放培养箱中10min，约70%左右的细胞能下来，细胞形态也还可以，请问还没有更好的消化条件或消化方法？

zly微笑

你的胰酶是不是刚从冰箱里拿出来就用了啊？最好在37度培养箱里面先预热15到20分钟，因为胰酶在37度时消化作用最强，一般2分钟就可以了

zly微笑

你的胰酶是不是刚从冰箱里拿出来就用了啊？最好在37度培养箱里面先预热15到20分钟，因为胰酶在37度时消化作用最强，一般2分钟就可以了

yinjiqingqq

可以试一下accutase，对细胞损伤小，但是有点小贵啊

郝晓英

用第一种胰酶即可  肯定要预热至37度  一般消化时间在1分钟左右  如果不纯的话借机可以提纯   没有消化下来的证明就不是MSC  是人的还是动物的？

天山飞鹤

回复 zly微笑 的帖子: C6 M( x; O9 V9 O9 I: e7 Y
1 i# b  ~2 m1 f) [. C
我的胰酶是拿出来放超净台大概十几分钟后再用的，可能温度低会有影响。不过先在培养箱里预热约15-20分钟会不会使用剩下的胰酶作用减弱？难道还要每次分装胰酶，然后再预热？

天山飞鹤

% ~! P! I, _8 c4 ~7 k
: Q# P$ z- p7 `# T% i4 E5 y/ K& I回复 郝晓英 的帖子+ w% g7 l6 h3 }! t* {! n" h
0 J- ~* k7 z2 b$ C" u
是大鼠的骨髓间充质，理论上应该是很好消化的。你们是每次用之前分装所需用量的胰酶，培养箱中预热后再消化？消化时需不需再放培养箱中？

郝晓英

回复 天山飞鹤 的帖子
* t$ ]1 ~: D/ ?
! v3 {+ x& y+ R' g9 \. P! {没有分装  直接吧装胰酶的瓶子放在水浴锅里预热   消化时也不需要放在培养箱里  理论上   实际上都好消化    如果如你所述那样难消化   估计就不是MSC   

天山飞鹤

回复 郝晓英 的帖子
" F5 i5 N9 }/ O8 ~* a  I6 i- u; z- c9 r! `& B9 f- G: F
反复预热会不会使胰酶降低功效？

郝晓英

回复 天山飞鹤 的帖子
0 N* u8 O2 Q) h. M' g+ G- Y  @( g5 W  Q0 {; Z5 T/ H' ]1 d
没关系的  你如果愿意分装当然也是可以的