为什么病毒转染效率高，却不能感染相同293t细胞？

wangsandan0503

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* X% K' [7 y' _9 s5 H0 t/ K/ y1 C7 Y$ H1 S1 P" v* I) d. l
对，这个问题是什么原因呢？

wangsandan0503

回复 xiaoyurly 的帖子
; v# q4 n5 j3 Q2 u3 `
' f) e1 j8 Y+ K4 l# W0 Y你好  我的详细步骤  在9楼  请多多指教

wangsandan0503

回复 cicadacjk 的帖子& n  a/ Y- B, B( H2 L, o
6 q3 Q  c# T3 g& V" L4 z
可以确定可以感染人的细胞，lipo2000转染效率高吗？

rexhz

可以试试钙转的.我们用293T做钙转都很好。我看到文献用PEI产病毒都是用293来做的，而且是悬浮培养

ellapan

ok 我虽然采用的是cacl的方法，但是估计道理想通，我感觉你换液的时间8hour却是不合适，我们一般都是24 hour的 不知道是不是不同方法之间差异？

xiaoyurly

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6 B) m& h0 h" e" Q9 D/ ]6 Q! S  B9 a# c2 ]! P" a5 Y' E! L, L4 F
这个方法还不是特别详细，不知你用多大盘的细胞来包装病毒。PEI与质粒的用量又分别是多少？PEI有一定细胞毒性，我们用它转染细胞时孵育4-5h即换液，做病毒时一般48h收集，病毒上清液1500rpm离心然后过滤。病毒转染时加polybrene 4-8ug/ml，5h后换液。病毒再转染293T时是多大孔板？有用其他细胞验证过吗？病毒转染后有没有观察更长的时间如36h、48h等？病毒液好像没有超离心浓缩，只有病毒滴度特别高的时候才可直接转染，否则还是浓缩一下效果比较好。
0 F+ l; N' l4 C) }6 @* M: T0 t3 `如果还是不行的话就换磷酸钙法或者其他转染试剂吧。

kongpzh

有荧光并不代表病毒包装成功。荧光只是质粒转染进去的标志。9 L4 Q; j+ w# i9 r  v/ ?: L0 F
病毒包装成功还需要很多其他的因素，比如质粒之间的比例、细胞状态等。
' u( r2 S# D% `% `% O1 P5 J8 X如果病毒包装的滴度很低，那很可能就出现你这种现象。