为什么病毒转染效率高，却不能感染相同293t细胞？

wangsandan0503

回复 momocy 的帖子; t- d3 x+ s, @' ~

& N/ Z) {/ K9 @7 v  b5 M$ I对，这个问题是什么原因呢？

wangsandan0503

回复 xiaoyurly 的帖子/ s/ x, E' J# l; U+ ]4 p1 L

. k0 n$ V' n3 U6 |% }. f2 K你好  我的详细步骤  在9楼  请多多指教

wangsandan0503

回复 cicadacjk 的帖子) S3 w6 b/ u) ^. e

# |$ x& Y" l. A( K可以确定可以感染人的细胞，lipo2000转染效率高吗？

rexhz

可以试试钙转的.我们用293T做钙转都很好。我看到文献用PEI产病毒都是用293来做的，而且是悬浮培养

ellapan

ok 我虽然采用的是cacl的方法，但是估计道理想通，我感觉你换液的时间8hour却是不合适，我们一般都是24 hour的 不知道是不是不同方法之间差异？

xiaoyurly

回复 wangsandan0503 的帖子
7 O4 p- K7 g* f5 V
; ]4 V# t! Y% \; s这个方法还不是特别详细，不知你用多大盘的细胞来包装病毒。PEI与质粒的用量又分别是多少？PEI有一定细胞毒性，我们用它转染细胞时孵育4-5h即换液，做病毒时一般48h收集，病毒上清液1500rpm离心然后过滤。病毒转染时加polybrene 4-8ug/ml，5h后换液。病毒再转染293T时是多大孔板？有用其他细胞验证过吗？病毒转染后有没有观察更长的时间如36h、48h等？病毒液好像没有超离心浓缩，只有病毒滴度特别高的时候才可直接转染，否则还是浓缩一下效果比较好。
5 p3 _$ }; o! b3 j$ X3 S如果还是不行的话就换磷酸钙法或者其他转染试剂吧。

kongpzh

有荧光并不代表病毒包装成功。荧光只是质粒转染进去的标志。
! D9 E) c( x3 [( {1 z病毒包装成功还需要很多其他的因素，比如质粒之间的比例、细胞状态等。
7 x, F9 k# h) s如果病毒包装的滴度很低，那很可能就出现你这种现象。