转染-筛选-病毒

sizhengliu

今天想到一个问题，我们一般制备病毒是“质粒转染-收毒-丢弃包装细胞”，可不可以在质粒转染后，筛选稳定的细胞，来持续合成和收集病毒呢？

l19rna

细胞都被病毒裂解了哪来的稳定株，除非你加个可诱导启动子之类的

bigchock

不可以。( l/ j# u0 e) \6 }; u8 t  f$ O- a
1.细胞裂解才能产生大量的病毒颗粒. d6 L) |: q: Y9 v2 w2 t' k
2.即使有稳定转染几率，一来包装的3-4种质粒也不可能按理想比例的同时稳定的表达。

Yedan

LZ说的是Adenovirus？这种病毒确实是收毒的时候要裂完细胞收的。
8 J# f, N& \: U$ G, E$ l# T6 wRetro的都是收上清的，那个时候细胞都裂掉了么？我孤陋寡闻了……# `! B# o* a, z( Y' _6 A  M
Plat-E/A/G这类包装细胞不就是LZ说的稳转之后的细胞么

sizhengliu

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( E8 I# F1 f# X; y( W5 V+ K: E( }* B3 j1 `
我说的是慢病毒。一般选293FT做包装细胞

sizhengliu

回复 bigchock 的帖子! ^4 P0 h% o3 H/ M$ l% Y6 H3 v; I
" r7 S$ g$ q. J5 N4 k, x0 W0 ~
慢病毒是收集上清液的，需要细胞裂解么？

Yedan

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# [3 L. W/ k# V$ b1 a" m: W3 ?2 n& t# {" n) \+ u3 V5 d5 g: B9 U
Lenti的我爱用293T包，LZ你的想法其实是很好的，因为每次转染3质粒太麻烦了。但是有个问题你考虑过么，每次包完毒的细胞都已经confluent，甚至都已经融合了，这样的细胞是没法继续要下去的.Plat包装系统其实就是符合你说的筛选稳定的细胞，可惜是retro的。

huangcong1988

如果细胞不破裂，慢病毒没法释放的，你再好好看看慢病毒包装的整个过程吧。质粒转染293T细胞以后，在293T细胞中形成构成病毒的RNA和蛋白外壳，然后宿主细胞（293T）裂解，释放慢病毒，然后我们才能收集病毒上清，所以说，经质粒转染收集病毒以后，细胞就已经裂解死亡，剩下的细胞，除非你这次收集病毒滴度很低，要么就是包毒能力差的细胞，所以转染后筛选收集细胞没用的

sizhengliu

回复 huangcong1988 的帖子% U5 I: Y5 Y; \; H. H/ x

/ B- [2 o6 H2 R# _$ c+ ]0 Y明白了，谢谢！

张也行

LZ提出这种想法可能也是觉得几个质粒共转染的方法有些麻烦吧。但是只所以这么做也是从安全的角度着想。以前的病毒生产方法确实很简单，但是却有包装出野生型病毒的可能，还是安全第一吧。