血管平滑肌细胞怎么就是养不活？郁闷啊！求解。

henryjia

想从脐带动静脉中分离血管平滑肌细胞，可是怎样都不行。我用的方法如下：: m" G4 Y5 C( L" q

2 {& R+ D  y/ F1 }( ]; Y/ X: b# t1.机械剥离平滑肌层，1型胶原酶消化，或者切成小块直接贴壁- O2 m! O$ y% `3 H3 E. x$ i
2.培养基： DMEM+10%FBS+1%Glutmine; V. `8 {1 k. j

8 k( A" t% P9 H* n/ c, i消化的见到细胞出来；贴壁的也见组织块贴壁良好。可就是不见细胞生长？5 S# m' C' u( k

2 F( D1 ~, x7 ?6 g* A1 s几个问题：& X0 |* B4 Q, v; f8 T
1.关于培养基： 是否要用alpha-MEM或者DMEM/F12； 血清是否要特殊选择？
* Q) f( K- |8 L3 j0 u# }' {, V2. 剥离有啥窍门不？
$ I6 m* k9 c" C8 }4 l# P8 v4 J* o6 u4 s
愁啊！求解。多谢了

songxinxing

原代培养细胞可以先用20%FBS培养，组织块的话不要频繁挪动，大约一周才会长出平滑肌细胞3 f4 p1 U7 P. X( Q; O( e
另外培养基可以选择DMEM HIGH GLUCOSE 高糖,我曾经养过主动脉血管平滑肌细胞系用的培养基是GIBCO的DMEM/F12  V& F9 i3 F. I6 D* S: n
平滑肌细胞还是比较好养的，祝你好运！