肿瘤干细胞的提取方法

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看文献说，　如果marker已知，MACS及FACS有很大的优越性，分选的细胞纯度较高，而且高效快捷。但在marker未知的情况下，则可先以有限稀释法做初选，得到单细胞克隆，再进行免疫磁珠分选即可得到较多的CSC。肿瘤干细胞有可能会分化，那么单克隆实验条件下，会出现具有不同marker的细胞，包括肿瘤干细胞、过渡细胞和其它各类肿瘤细胞。因此，有限稀释法在得到单细胞克隆的同时，还可同时鉴定肿瘤干细胞的分化能力。
/ Q1 G0 F5 j" {但是悬浮球培养法不是分选和鉴定一步到位吗？即肿瘤细胞在添加了生长因子的无血清培养基中生长，其中的CSC增殖而形成致密球状，保持不分化状态；而非CSC则贴壁生长，且在无血清条件下生长速度缓慢。将此悬浮球在加入表皮生长因子、碱性成纤维生长因子等的培养基中培养，可促进肿瘤细胞增殖，并传代多次；置于含血清培养基中，则可发生多向分化；接种于裸鼠，可体内成瘤。; E* n/ s/ h0 A4 r( {- y) `
老板让我做子宫内膜癌干细胞提取，到底用哪种方法比较好啊？还有悬浮球培养法中悬浮球怎么分离啊？望坛里的高手指点，谢谢。

zhanglianglu

提取子宫内膜干细胞，要做什么？
3 Y8 I  P/ W1 h9 [为什么要传代后接种裸鼠？

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回复 zhanglianglu 的帖子, Q" U8 {0 a# Y# D4 X0 O- T7 B5 B

$ E* @4 s+ L: L, u. ], H接种裸鼠是验证肿瘤干细胞的一种方法，即裸鼠成瘤，你提取的假定CSC是否有干性还得验证，而裸鼠成瘤是最权威的方法，我提取csc是想做耐药方面的后续实验。

doundo

我取原代后，用悬浮培养的方法。成球的效率还不错。但是没有成球的肿瘤细胞也是悬浮的（纤维细胞是贴壁的），所以分离球是很麻烦的事情。后来我想了办法，用40um的细胞滤器过滤。虽然会损失不少球，但还是能把比较大的球分离出来。你可以试试。
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不知道哪位有更好的办法。

jojomayer

doundo 发表于 2012-1-26 11:37 $ R9 P. `9 W+ C! M0 E% y
我取原代后，用悬浮培养的方法。成球的效率还不错。但是没有成球的肿瘤细胞也是悬浮的（纤维细胞是贴壁的） ...

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“没有成裘德肿瘤细胞也是悬浮的” 意思是这些细胞是单细胞悬浮的？那么您认为这些细胞是什么细胞呢？已经分化的肿瘤细胞？还是介于干细胞样细胞和已分化细胞之间的前体细胞？

cocoslee

我也想知道这些悬浮的细胞是不是肿瘤干细胞？在培养基里几乎是不长的，后续的实验没办法进行下去。