请教华通氏胶的剥离

quge_00

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) e, O  h/ }- Z4 v# ~0 ?, L, W6 j  U# n% z你的脐带状态不是太好吧，剥颜色是瓷白色的吗?离时容易破碎吗?如果是有半透明的感觉就有水肿，不太好养出细胞了。
( _$ \% K- d! \1 j4 Q' ]脐带应该是柔韧的组织，不管怎样，原代组织细胞培养，无菌操作永远是第一位的（分离脐带胶全程器械操作，手套也是非常脏的。。。）。组织块要贴壁良好细胞才容易爬出来。( L3 X' U, r0 A" j4 ?8 t; A& i
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huajie881026

quge_00 发表于 2012-8-11 21:07 , v* e- O3 d) x# B$ O) [- I* v4 h9 S
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- |0 [* H3 {' k% q. U7 X, M# G; e9 x
你的脐带状态不是太好吧，剥颜色是瓷白色的吗?离时容易破碎吗?如果是有半透明 ...

+ g3 Z* a' v* x& _
请教，多少组织块能爬出细胞？我没剥，但是爬出细胞的组织块较少，大概十个有两个左右能爬出来。

quge_00

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# p1 M* n& F, U+ y
3 L5 ?5 I; A$ F$ _/ D) \- l+ Q2 j其实我的效率也很低，大概是40-50%（观察太多了，培养液太多了，组织块就用以松动了，细胞爬出来的少，估计我就是这个原因。有人贴壁4h后加液，有人30min后加液，我用的是前者，贴壁比后者好很多。），有时候细胞是单个的分散贴壁，有时候是多个聚集（估计能长成一个集落）的，都是2-3mm3大小的组织块常见细胞爬出来较多，只要是间充质细胞，爬出来后是长得很快的，我的一般要3-4周长到80%就传代了。我用的是培养皿（有人用培养瓶）。培养液用的是DMEM/F12+10%FBS(GIBCO澳大利亚进口)。

quge_00

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, F$ _, L/ ^( U# z$ v' C6 A9 @& ?' F' _  Z/ }6 O$ Y3 k8 T
我一般是3-4cm脐带的组织块种在一个培养皿里~~我也是初学者，大家都交流交流~~~

huajie881026

quge_00 发表于 2012-8-12 08:37
. o1 P( V' {* A4 P6 E( A回复 huajie881026 的帖子4 k$ b- d9 N- {9 E5 G( l
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其实我的效率也很低，大概是40-50%（观察太多了，培养液太多了，组织块就用以松 ...

( ?" D, d# v2 x  n! g  y/ E7 ?贴壁4小时加培养基？组织块不会干死吗？我30min就加培养基了，贴是贴的满好的，就是产率太低了，我看文献上说2周后有细胞爬出，就可以把组织块去掉，4周左右长满80%传代！我现在已经三周了，还没把组织块去掉，因为爬出细胞的组织块太少，20%左右，还想再等等！

quge_00

回复 huajie881026 的帖子* T7 H& Y) ^% g0 ]
4 ~) P4 S" _+ A+ o8 z
我也是的，14天左右出细胞，4周左右传代。
  c5 }4 a; k& y: o6 P# w9 X组织块不会干的~~~

细胞海洋

回复 bibottll 的帖子+ J" i8 c  q. H+ T9 a

1 Z1 z5 \. \4 `' [1 u建议你发新帖提问

huajie881026

quge_00 发表于 2012-8-12 21:48 . Y+ O# e" M4 N
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, G- q+ `; X" c. T5 v- S# i$ l6 [% q* N) M; ]
我也是的，14天左右出细胞，4周左右传代。

; J2 i! G5 h+ u. N还有一事请教：你一次用多少脐带做？因为我一般弄到脐带已是中午或者下午，一条10cm'的脐带就够我做到晚上了，我想一次多弄一点，弄个30cm，做不完第二天再做，产率应该不会受影响吧？

bibottll

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/ j7 D0 Y) f( e) `: ]8 w: Q好的谢谢

quge_00

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+ h7 u& I0 |4 g( c2 C
0 E4 N8 Z$ e0 [我处理的都是10cm-20cm长短不等的脐带，每次一根。我的方法是先把整根脐带外膜和血管钝性剥离，完后，在用两把止血钳把基质胶撕成薄薄的细条膜状，然后再剪刀粉碎。每次从清洗脐带到组织块接种大概要1.5h。练得多了就熟练了。我的是贴壁时间比较长（4-5h），因此都是早上作下午加液。听说24h内处理都没问题，估计泡在4℃的培养液里，第2天应该也没问题（没试过，听别人说的）。