请教华通氏胶的剥离

quge_00

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你的脐带状态不是太好吧，剥颜色是瓷白色的吗?离时容易破碎吗?如果是有半透明的感觉就有水肿，不太好养出细胞了。$ h4 Y; j% |0 S1 g" k2 _
脐带应该是柔韧的组织，不管怎样，原代组织细胞培养，无菌操作永远是第一位的（分离脐带胶全程器械操作，手套也是非常脏的。。。）。组织块要贴壁良好细胞才容易爬出来。0 e, r/ ~: j! [4 _8 I

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huajie881026

quge_00 发表于 2012-8-11 21:07
" X0 n% S" Z' R" `8 F! g回复 上帝帮我转运吧 的帖子
( J/ a! d& x' z7 B, t& y+ I# a6 q* G
4 E. U. {0 ?1 T' O& g# L你的脐带状态不是太好吧，剥颜色是瓷白色的吗?离时容易破碎吗?如果是有半透明 ...

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请教，多少组织块能爬出细胞？我没剥，但是爬出细胞的组织块较少，大概十个有两个左右能爬出来。

quge_00

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% s# h" o; e1 l2 y. J
4 ?0 \# L' q) q其实我的效率也很低，大概是40-50%（观察太多了，培养液太多了，组织块就用以松动了，细胞爬出来的少，估计我就是这个原因。有人贴壁4h后加液，有人30min后加液，我用的是前者，贴壁比后者好很多。），有时候细胞是单个的分散贴壁，有时候是多个聚集（估计能长成一个集落）的，都是2-3mm3大小的组织块常见细胞爬出来较多，只要是间充质细胞，爬出来后是长得很快的，我的一般要3-4周长到80%就传代了。我用的是培养皿（有人用培养瓶）。培养液用的是DMEM/F12+10%FBS(GIBCO澳大利亚进口)。

quge_00

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6 W& y  P, E$ w  ~- z我一般是3-4cm脐带的组织块种在一个培养皿里~~我也是初学者，大家都交流交流~~~

huajie881026

quge_00 发表于 2012-8-12 08:37 5 B8 g% X4 \: b9 R
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2 z" x+ o+ N1 f  @6 o: J9 x. i$ E& e其实我的效率也很低，大概是40-50%（观察太多了，培养液太多了，组织块就用以松 ...

: V! k) e# T6 j% x
贴壁4小时加培养基？组织块不会干死吗？我30min就加培养基了，贴是贴的满好的，就是产率太低了，我看文献上说2周后有细胞爬出，就可以把组织块去掉，4周左右长满80%传代！我现在已经三周了，还没把组织块去掉，因为爬出细胞的组织块太少，20%左右，还想再等等！

quge_00

回复 huajie881026 的帖子5 X7 W% x: B3 q. R+ w+ H
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我也是的，14天左右出细胞，4周左右传代。; m% j* Q3 l' z9 ~
组织块不会干的~~~

细胞海洋

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huajie881026

quge_00 发表于 2012-8-12 21:48
3 J4 r/ d3 t# g: p0 z& }; s  Q回复 huajie881026 的帖子% T$ ]& h; J1 [% b6 ]

# |+ h) |8 u" p, S我也是的，14天左右出细胞，4周左右传代。

" d" ^9 i/ g+ Q5 q还有一事请教：你一次用多少脐带做？因为我一般弄到脐带已是中午或者下午，一条10cm'的脐带就够我做到晚上了，我想一次多弄一点，弄个30cm，做不完第二天再做，产率应该不会受影响吧？

bibottll

回复 细胞海洋 的帖子' n0 H" Q3 N# q& [1 E

5 _" A5 J/ [& J" T% U$ d; v) m好的谢谢

quge_00

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我处理的都是10cm-20cm长短不等的脐带，每次一根。我的方法是先把整根脐带外膜和血管钝性剥离，完后，在用两把止血钳把基质胶撕成薄薄的细条膜状，然后再剪刀粉碎。每次从清洗脐带到组织块接种大概要1.5h。练得多了就熟练了。我的是贴壁时间比较长（4-5h），因此都是早上作下午加液。听说24h内处理都没问题，估计泡在4℃的培养液里，第2天应该也没问题（没试过，听别人说的）。