胶原酶、accutase还是dispase？

Dongqin11

已找到Accutase包含了蛋白水解酶和胶原溶解酶，但是还是想问一下，它和0.05%Trypsin相比温和度怎么样？

也行天下

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! P( N* H' w4 _, W6 d  s
" u5 T: l6 l2 `- w! faccutase要比0.05%胰酶温和，但比胶原酶要强得多，比dispase也强，accutase是将iPS克隆消化成单细胞，我们在制作EB时用，饲养层和无饲养层培养的iPS细胞传代都用胶原酶。

lchanlon

if you culture ips cells in feeder, the collagenase IV is a good choice. But for feeder free, Accutase and dispase is not good. I suggest you use 0.5 mM EDTA in PBS. for 33mm dish, add 2ml of 0.5 mM EDTA, incubate at room temperature for 3-5 minutes, aspirate the EDTA. Then add 1 ml of medium using  1 ml pipet, pipet up and down to disassociate the ips cell and transfer into a new tube.
% |# H* v# }- n6 j; r' D+ G. {" x" C* ]5 s: {
补充内容 (2012-9-22 10:12):
5 o/ y6 O) Z. I" O$ ?/ W* BIn our lab, it works well. this protocol from James A Thomson laboratory

sizhengliu

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4 G1 O# k/ ^0 @0 v1 T& _/ s( u* ?: A- k' K2 [0 C' i( D
thank you vary much!

shuishan

Accutase是胰酶的替代品，是含EDTA的PBS溶液
1 J+ p, z+ k, y

第一心音

经典的，胶原酶，不过要饲养层，不知道能不能帮助你

bubble_w

回复 sizhengliu 的帖子* i* q) l4 ]- D  Q: J! {
4 T7 `( ]3 h; g& \9 a1 D2 P* s$ E
小鼠的iPS选择胰酶或者accutase消化，人的iPS选择胶原酶4或者dispase，dispase消化的效果最温和了。我一直在用accutase，这个酶消化完的细胞是小的细胞团块，3个细胞左右，非常适合小鼠干细胞高比例传代，37度作用2-3分钟，消化程度刚刚好。accutase和dispase，gibco都有成品，买回来分装后就可以直接用，非常方便。accutase大概800左右，dispase貌似要3000？我记不清楚了。

sizhengliu

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6 G' o/ I, h. @3 L. S
4 d+ g% ^2 H* j谢谢你的详细解答！我做人的ips，请教：胶原酶4的配置液体和使用浓度是什么？

sizhengliu

回复 第一心音 的帖子! F4 O0 ?4 a6 C& W1 I

2 F( s" H: t- o; Y是的，请教：你认为在人的ips传代中，有必要去除feeder吗？

bubble_w

回复 sizhengliu 的帖子: ?; x# Y- q6 L3 v6 e1 Z( N: b4 b1 y
5 Q, a7 A% S5 X7 q4 u0 c- L
用DMEM/F12 1:1 配置胶原酶4的工作液，工作浓度是1mg/ml。 配置的量看你养细胞的数量了，可以配置30ml的工作液，分装为1ml，与-20℃保存，每次解冻一只使用，这样消化的效果好。