得到EB之后，如何向神经方向诱导？

jessewill

我看到了有人用ITSFn培养基筛选，有人用RA诱导，
& C$ I/ [: g+ i6 a( I& S& {但是这两种东西我们实验室目前都没有。。。
) U: V# I- a/ i& r我在想能不能用DMEM/F12+Neurobasal+N2B27+bFGF来诱导向neural stem cell分化。。。感激不尽

lingminliang

以前用过 不过记不太清了 好像只用用DMEM/F12就行了

开心果王

如果只是简单的鉴定向神经分化的话，用N2B27可以的，我用这个培养之后，tuj1和gfap阳性的细胞都有！不过我在加bFGF时，容易使贴壁的团块隆起。

jessewill

回复 开心果王 的帖子. I2 Y8 p! W* L9 Y" W8 T; c: n
0 {! X3 j+ X9 A& X
隆起说明什么呢？增值过多？瞎猜啊

开心果王

我也没想明白！就是细胞团块一部分细胞不再贴壁了。卷起来了，看着就像隆起来了，感觉是bFGF和EGF改变了细胞的外基质，也可能是个案，楼主可以试一试先！

dianying

回复 开心果王 的帖子
. X( i5 {) v6 g3 T7 H; d* m: E" Q# b5 I
你用的gGAP是哪的呀？你培养了多久就能有表达了？你的bFGF 的浓度是多少？有团块隆起的细胞照片吗？
9 Q, j- k) X, X( x7 M4 N不好意思，问题多了点。--谢谢

开心果王

悬浮培养了6d，后贴壁了6-7d就固定做IF了，团块隆起倒没记录下来，抗体是别的实验室惠赠的，sigma，货号就不记得了！

dianying

回复 开心果王 的帖子. n; ^! }$ M$ q7 ^  k9 G

* f' q: ]! s# S* A3 B听起来你染的是rossette？你确定在rossette stage有gFAP 表达吗？

dianying

回复 jessewill 的帖子, s9 d8 A0 x8 L* L, p- p

5 q  Y/ @7 M3 c" Y你得到EB以后，可以让它贴壁挑出rossette,再到npc，之后在诱导分化--这是一条老路。
, y5 d& b# u/ o你的思路也不妨一试，试验都是摸索中来的。
4 u4 _# o" N$ ?现在也有人在用特殊的培养基直接能拿到npc，这条路省时间，但是费钱。