间充质干细胞96孔板换液问题

nicolelea

各位前辈，我用脐带间充质干细胞铺96孔板，24小时候，观察细胞，细胞状态良好。随后我需要换掉旧培养基，换其他成分。可换成分后，感觉细胞就被冲掉了。我是倾斜培养板吸取就培养液，这部后看细胞还行，没啥变化。加入新培养基后，细胞就脱板，我是贴着96孔板每孔侧壁缓慢加入的，还是有脱的现象，有没有什么好的方法能避免？
  _5 Z5 s; A0 \/ v1 q2 s5 M' ^6 k6 _( }实验进度如龟爬，望给位前辈赐教，谢谢！

liluli0715

你做的是分化实验吗？我们做成骨分化实验出现过这种现状，主要是细胞密度太大了或者说局部密度过大

学无止境

随后我需要换掉旧培养基，换其他成分？# g$ o( u% C& w/ ]* g; e5 Q4 ^0 V" P
除了肿瘤细胞外，好像其他细胞都不能再在培养过程中更好培养基吧，一换培养基，细胞就会漂了。

xbs530515

是否可以考虑换半液，恐怕细胞不能很快适应新培养基，活性下降？还有一点需要确定一下，你留几个细胞孔不要动，看相同时间细胞是否会漂浮。不排除原代细胞只能存活这么长的时间。

haibara007007

同意楼上的见解，可能是细胞适应的问题，建议采取逐渐换液的方法

shuixiao

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3 Q* y# N3 X  D' Y: s  o8 t' x) S
$ X& q7 I" X# ]. Y5 l* J( }% K分化试验中，细胞脱板是很常见的，操作的时候一定要小心仔细。
  p$ z& H2 L1 \间充质干细胞一般贴壁还是比较牢固的，如果是在平时培养中出现这种情况，那要考虑是不是培养板的问题。记得原先实验室有一批国产的细胞培养板，没人敢用，就送给楼上基础所的同学用，结果用那些板子养的细胞贴壁很差……呵呵，从此以后再也没人敢买国产的细胞培养板了……

nicolelea

汇报下，不是做分化实验。如果不懂，48小时一般都不会掉下来2 Q# f; _3 y" J9 E
上次做了两个不同克隆，一个就会掉的一塌糊涂，一个就很整齐。。。哎，纠结。。。

owenlion

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# j" j% T/ E$ D. j2 R- u1 h% Z( f7 l- V
你可以考虑下 是换液的原因还是更换培养基成分造成的？ 个人觉得换液操作不会造成你说的这种情况

nicolelea

好的，谢谢，我再试试，我觉得可能还是和细胞密度有关，我再观察下^^