饲养层的问题

huangcong1988

制了饲养层，但是不知道饲养层制的怎么样，有什么方法能鉴别饲养层制的好坏吗？还有饲养层接种到六孔板长满以后还能再冻存以后用么？

song58

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镜检，看看feeder状态如何，例如密度、细胞铺展的情况，做的多了有时候看一下就有感觉了。
, V! h( W! S/ m你说饲养层接到六孔板，是MC处理过的吗？要是MC处理过的，还怎么能长满呢？

wangyimei

做好的经灭活处理的饲养层细胞要先用来培养一段时间的胚胎干细胞，看看胚胎干细胞状态怎么样，要是细胞状态好的话，说明饲养层制备的没有问题。

huangcong1988

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是用MC处理过的，不过我是T25瓶里面养的，然后处理的，所以处理完了之后加了8ml培养基，然后接种到6孔板中，4个孔，每个孔2ml，所以细胞可能比较密，贴壁后都是满的

huangcong1988

回复 wangyimei 的帖子6 B+ c3 }* R  ~* L2 E4 a9 q

4 D! {" ?4 V- y谢谢

zhouxiangya

回复 huangcong1988 的帖子: q4 b9 f7 ]6 r. B) j1 Z

+ H# E/ I1 V. t. }8 t5 S7 q9 O可以预铺一下，一个T25一般1*106饲养层细胞，24小时等饲养层细胞贴壁后，看看细胞飘的多不多就能知道铺的好不好了。还有你这么灭活后又铺再冻的，细胞肯定受不了的吧。

xiaoqi

饲养层细胞已经处理过了，再冻存就不好了吧，细胞活性应该很低的。

song58

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9 h, o: ^+ E# w% M' bfeeder贴了以后再消化后重新铺，我试过，问题不大。+ v9 s/ v- X9 d
但要是feeder贴了以后再消化后再冻存，以后复苏的话会有许多细胞不贴，基本上就没法用了。