请教！我用无血清培养基养的胃癌原代细胞，为什么会出现这种小颗粒？

holywater

楼主是问培养，某人说什么手术的请一边去，跑题还有理了。不和你玩了，说实在的，我看到某些人帖子写的非常可笑，我都懒的理--现在省事了。5 I2 @+ Y0 ^9 \: u0 d

0 R$ C: g2 }# V3 E8 n0 @说实在的我回帖子是看得起你，但是你就这样子，算啦。今后除了有美女请教我，我才不去纠正别人错误呢～～

细胞海洋

大家围绕学术问题互相交流 不要互相指责 大家的出发点都是好的 不要因为观点不同而互相攻击。
  L. w/ B- T3 q# B7 e
5 V& w/ E; p& I7 z0 A; {; z% B两位朋友握握手 没必要这样的
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evial

0 W4 L. o. R  q
' j' ~; r7 W. m+ ~
我一直在想组织用酒精浸泡的事，从科学角度看问题么，越辩越明是好事。酒精可以是蛋白质瞬间凝固，肝癌有的可以用酒精灌注就是利用组织坏死的原理杀死部分癌细胞，但用的是无水酒精还有脱水作用。但在细胞坏死时释放各种坏死因子，我没做过调研，外面的细胞浸泡酒精坏死了会不会对里面的组织产生影响，逐而影响实验结果？

暮色英雄

回复 evial 的帖子
# O$ |  ^' k  a7 G% V- ?& \  k2 u& M# }& i  h8 o- ]1 ]
我在培养两种原代，胃癌和胶质瘤的，都是遇到这种问题。两天前我单独把培养基倒出来培养，并且把加了EGF和bFGF的培养基也单独倒出来培养，今天发现，加了EGF和bFGF的培养基的这盘里面长满了小圆球，而且还在动，估计是EGF和bFGF污染了，不是来自肿瘤组织

暮色英雄

回复 holywater 的帖子# Z3 l" K/ Z% y* @5 [; M" G

  D9 {$ q7 v; z9 @: B额，我的肿瘤组织是来源于医院，我们跟医院合作的，他们切下肿瘤，然后我过去拿。顺便说一下，他们切下肿瘤的时候是放在保存液里面4度保存的（DMEM：FBS：DMSO=7:2:1），不知道这个组织冻存液配方有没有问题。从切下肿瘤到我拿回实验室，中间大概有5个小时

evial

外科主刀在切下肿瘤后要快速放入培养基里面，有时他们不知道你要做什么实验，因为有的试验不做细胞培养不用无菌操作对待，那么他或者护士可能放在不是无菌的地方，手术台上盘子是无菌的，但是周围其他东西是有菌的，如果碰过那么脑瘤也会染菌。你要告诉他们你的目的，外科医生都会懂得，无菌操作是外科基本常识。, @; U. l% g, h% s; O6 j
为什么要用DMSO呢？你那里看来这种方法？那是用来冻存细胞的，用来稳定细胞不要被冰晶涨破，多少对细胞有点不好。所以你要是直接提细胞的就放在一般培养基里面带到实验室好了，时间短的话平衡液、生理盐水都可以的。医用静脉级别的平衡液、生理盐水要比PBS好，人静脉都能用没有致热源更没有细菌，所以你可以去医院搞一点来。比你买PBS又便宜又安全。

evial

还有就是你的操作没注意无菌要求，或者细胞房不是很干净了