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[请教] ES转染 [复制链接]

fananran2003

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包包
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楼主
发表于 2012-3-7 10:45 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
有哪位大神做过干细胞的转染，能否指导一下，效率极其低下，怎么回事啊？
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歪歪

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沙发
发表于 2012-3-7 11:58 |只看该作者
你转染时候用的什么培养基？
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歪歪

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藤椅
发表于 2012-3-7 12:01 |只看该作者
你转染时候用的什么培养基？
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fananran2003

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板凳
发表于 2012-3-9 08:49 |只看该作者
干细胞之家微信公众号
opti-MEM
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初学者

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报纸
发表于 2012-3-24 21:20 |只看该作者
电转
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salomemao

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地板
发表于 2012-3-26 22:55 |只看该作者
一般都用慢病毒包装系统吧，这样效率会高一点。如果能筛选到稳定表达的细胞，那就更好了
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精神病院小萝卜

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7楼
发表于 2012-3-27 15:14 |只看该作者
用怎样的电转条件？是电转怎样怎样的DNA？一般质粒会比线性化的DNA容易转进。
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精神病院小萝卜

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8楼
发表于 2012-3-27 15:14 |只看该作者
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4 b7 M* w3 {) ^& K
( s# z! s& |( \" A* H转染的时候不是都应该用无钙镁的DPBS吗？
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jefferson

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专家 优秀会员 金话筒

9楼
发表于 2012-3-27 18:58 |只看该作者
这个问题问的很难回答你。* j& U* L5 s  g; W

! M& m$ ~4 u; H0 m0 q首先你最好说明下你的具体操作方法，以便大家帮你分析。从你的描述看，应该是用非病毒方法转的，但是用电转，核转，脂质体还是其他什么方法转的，都不知道，很难回答你的问题啊。0 d! [8 d7 @1 \5 `
; M$ h- r) i( Z* N
一般来说，用非病毒方法转的话，用电转的多一些，相对的效率也是比较高的。具体电转的条件需要你去摸索，包括转的DNA的量，电转参数等。可以参考相近的文献然后摸索最佳电转条件。  N& A: r1 [% l! p0 b& L; b- V8 V
) o9 u1 U6 S, Z: @4 G# I
如果用脂质体等转染试剂转ES，效率是很低的，用的也比较少。如果有条件，建议放弃转染试剂的尝试，用电转或核转做。
+ Y- B1 P' @) X# C2 N
: K9 U1 X& u1 X. `. {要转一个基因到干细胞，效率最高的还是用病毒，而且可以获得稳定表达的细胞克隆。逆转录或慢病毒比较常用。构建相应的载体，包装后用病毒感染ES细胞，一般可获得大于50%的效率。
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ying

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金话筒 优秀会员

10楼
发表于 2012-3-29 13:08 |只看该作者
回复 jefferson 的帖子' ~. ~* a6 a0 O  f; r- Y1 c

3 B7 O; L+ [% I7 D% I; G/ t) v0 O请问你转染得到的50%效率那种方法，细胞和有效病毒之比为多少？1：10？1：50？或者更多？一个孔里加多少细胞？50000？100000？或者根本就是长在feeder上的小号或者大号克隆？谢谢 ：）
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