biolabs的磁珠

varing

      最近用磁珠分选细胞，使用的是biolabs的磁珠，磁珠上联的是anti-rabbit antibody。我这几次用的方法是：先把细胞和抗体孵育20分钟，洗涤后再和磁珠混合孵育20分钟，但拉出来的细胞比较少。0 D/ U: R0 r/ Y  y' K% T
    biolabs的推荐protocol上说的是：先用抗体和磁珠4度摇晃孵育至少一个小时，得到的磁珠再和细胞悬液孵育30分钟。
5 u; A. d) W2 S4 i; X. \) z, U8 a    不知道换了推荐方法后会不会好些，biolabs的磁珠与抗体的结合能力这么弱吗：虽然细胞膜上有抗体蛋白了，磁珠结合这个蛋白的能力不足，所以我拉不下来很多细胞？: O, b3 _) t' \3 G  A
    各位有这方面经验的前辈帮我分析一下吧,谢谢

redmaple

你用的是什么磁珠是连有protein a或g的吧。你应该根据你的抗体的制备方法，看看它与磁珠的亲和力到底是高还是低，大部分的抗体是IGg，可以用PROTEIN g 就可以，如果是IgM抗体，要用PROTEIN A， 如果不是很清楚就用A加G，亲和力不强可能影响结果，适当延长孵育时间。

varing

回复 redmaple 的帖子6 y% H/ B% C# c. u% l
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用的磁珠接的是抗rabbit IgG的抗体，应该是protein A。我遇到的是细胞得率的问题，按理说把细胞用抗体孵育后应该效果好些呢，但事实相反，我今天用standard protocol：先抗体与磁珠孵育，然后再用coated beads加入到细胞悬液中，得到的细胞比先抗体孵细胞得到的多。
3 e! |; a$ \% O' x1 G: |; V我个人理解，还是biolabs的磁珠结合一抗的能力不太好，必须把联有二抗的磁珠预先孵育一抗，而且时间不能低。这样倒是比较节省一抗，效果还比一抗孵育细胞的效果好点。4 Q' s' b* p, z3 ?& E& Z6 y
谢谢你的解答！