脐血干细胞复苏

andylee824

我都是用40℃解冻，这样快点。复苏细胞时，有时候还是有絮状沉淀，得率很低。也在研究这个问题

大少爷

看你的意思，你应该冻存的是脐血单个核细胞。
1 A2 p& V; C5 B; {: j+ c+ ~) a, u细胞冻存和复苏的过程是非常关键的，) t% ?( |3 j# M2 a! G
不知道你是怎么冻存的，降温程序冻存，还是程序降温盒冻存，所用的冻存程序是否成熟。
( E* ^+ d9 @* k( I7 Z复苏细胞速度要快，水浴锅调到温度40℃，在水中不停晃动冻存管，让细胞尽快溶化，待管中还有很小的冰粒时即可。
( s0 V% n( R1 X; @4 o+ u, G迅速拿到实验台准备操作。
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" ]' A* M( t! W) G1 H你的“在显微镜下用台盼兰染色观察，细胞的活性是100%”，这个不太可能吧。6 w- Z* B& }6 \1 h) X$ A: E" z
白色絮状沉物应该是胶原蛋白之类的东西。

jack063@163.com

9 }6 B2 e! Z0 t    （l）从液氮中取出冷冻管，迅速投入37～38 ℃水浴中，使其融化（1分钟左右）。
8 |3 i  f5 U0 H0 d    （2）5分钟内用培养液稀释至原体积的10倍以上。
0 K6 P, k! q; w) N    （3）低速离心10分钟。
: q, D6 M2 U1 R# g1 t- P7 l7 U   （4）去上清，加新鲜培养液培养刚复苏的细胞。
  W% a. y% @1 V3 l$ r6 h. z

mayanfeng

复苏完毕到你离心洗涤的时间是多少,DMSO常温下毒性很强,通常是带点冰晶或者放在4度的冰水中

542177563

回复 刘艳85 的帖子) m" a& _4 ]; y
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你好，我也是用的脐血，原本打算分离MSC和EPC的，可结果两个都没培养出来，可以把你的具体分离步骤发给我吗，谢谢！还有，我是坐地铁到很远的地方取的脐血，大概1h，因为没有血袋，我用的是5ml的抗凝管（平时科室里抽血用的那种），每个管子大概能抽3ml，路上用的是放有冰袋的泡沫盒装的。

刘艳85

用这种抗凝管应该没问题吧，平时取外周血也是这样做的吧。我分离的是MNC，没分离过MSC和EPC，可能它们的分离方法不同吧
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mayanfeng

我猜是你冻的干细胞里面还有红细胞跟其他细胞吧,只是简单的脐血除去部分红细胞跟血浆冻存吧,这种情况下复苏的细胞红细胞是大部分破碎的,沉淀应该是破碎的细胞,显微镜下看百分之百是不可能的,你们用的看细胞的显微镜倍数不够,血稀释的程度不够,另外再去查查显微镜下怎么区别红细胞跟干细胞吧

542177563

回复 刘艳85 的帖子, W8 f8 H0 w; C" l5 `

& ^' A9 B9 ~6 W8 @& g# n7 g应该差不多的，你是怎么分离脐血中的MNC的呢？希望能分享你的具体操作步骤，谢谢！

刘艳85

1、离心，2000rpm，10min，分离血浆和血细胞；
5 A3 F2 i1 H$ E' {; n2、去除血浆，血细胞与Ficoll分离液1:1混合，2000rpm，15min；& d' b/ N- b, E
3、收获其中的白膜层，就是MNC，用生理盐水洗涤后获得。
0 z; g0 X' o1 ~% O希望对你有所帮助。

刘艳85

大约半小时吧，这个影响大吗？我们洗涤两遍，想问一下，是不是在4℃的离心机中离心效果会好一些啊？这时候的温度比较低，DMSO的毒性可能不会那么显著