脐血干细胞复苏

刘艳85

我用FBS：DMSO为9:1的比例配冻存液，用于保存脐血干细胞，37℃水浴中溶化脐血干细胞，经离心洗涤，最后放入含1%白蛋白的生理盐水中，想问一下，为什么经过3-4h后会出现白色絮状沉淀？这个问题有什么比较好的解决方法吗？

redmaple

白色絮状沉淀，是核算么，难道细胞破裂了。复苏细胞关键是速度要快，最好让细胞溶化在30秒以内。让细胞尽可能快地度过冰晶期。

xiaf_0

最好上个图。你细胞数是多少，放在多少毫升生理盐水，用什么包装的。要说具体一些。( C: E( p8 y2 K7 |" }0 n
另外你脐血干用什么方法制备的？
' m, O) Q3 u8 g8 E$ r7 {我们使用ficoll法制备的，数量在2*107左右，如果放在冻存管中，细胞会沉淀下来

刘艳85

我用的是2ml的冻存管，在37℃水浴锅中30s内溶化不了，我用的时间大约是1分钟到1分30秒吧，是不是这个时间有些太长啊？进而对细胞有影响？
7 @1 U0 G, r1 r2 o1 X* h7 o

刘艳85

我们也是使用ficoll法制备的，数量在2*107左右，但是冻存复苏之后，细胞数明显下降了，细胞数为5.6X10的7次方，溶于含1%白蛋白的生理盐水中，放于40ml的离心管中。在显微镜下用台盼兰染色观察，细胞的活性是100%；即使是有白色絮状沉淀存在的条件下，细胞的活性也是100%，经测数发现，细胞的总数下降了，是不是死细胞啊？但是刚复苏时没有这种现象，是不是在一段时间之后细胞慢慢死亡啊？

tingwuyu

细胞死亡后裂解释放的遗传物质，我猜的，呵呵。
* u' J2 y) x+ C9 S$ z3 k做脐血库的人可能更了解吧。LZ冻存复苏脐血干嘛啊

肉丁

我想可能是细胞死亡粘连在一起了，复苏的时候要不时晃动，加速融化

上帝帮我转运吧

白蛋白可以多加一点。如果细胞数量浓度大了，沉淀下来我觉着不应该是细胞出问题了。不知道你冻存用1ml还是大于1ml，我曾经用1.5~1.8ml，30秒很难解冻，所以，我觉着复苏时间1分钟到1分半中问题不是很大。关键是你要在解冻后不能再呆在37度中了，最好在还有一点点冰晶时候拿出来。

刘艳85

谢谢！) {% f7 H- z5 x, ]% w! q2 U/ W
冻存管里所装的细胞约1.5ml，若是死细胞，是不是在生理盐水中慢慢的死亡，然后是释放的DNA缠绕死细胞，形成絮状沉淀，以至于即使有絮状沉淀，显微镜下看见的还都是活细胞。我试过放在含2%的白蛋白的生理盐水中，可是还是会出现絮状沉淀。是不是复苏或是冻存的过程中存下一些问题啊？纠结中   我观察这个现象的外界温度是20℃

Hunterofbetter

是不是冻存密度有点大？我一般用2ml冻存管只会装1ml的细胞，而且解冻的时候37°水浴锅确实30s不可能解冻，怎么也要70s，我一般都是这个时间，对细胞影响不大吧，每次解冻出来的细胞都还不错。另外个人认为白色絮状沉淀是死细胞