脐血干细胞复苏

andylee824

我都是用40℃解冻，这样快点。复苏细胞时，有时候还是有絮状沉淀，得率很低。也在研究这个问题

大少爷

看你的意思，你应该冻存的是脐血单个核细胞。
" |3 O+ Q4 R# t9 |& q) N细胞冻存和复苏的过程是非常关键的，
8 V  z2 A5 s- V5 z3 Y# A. g不知道你是怎么冻存的，降温程序冻存，还是程序降温盒冻存，所用的冻存程序是否成熟。
& A0 z. `( s/ Y4 J复苏细胞速度要快，水浴锅调到温度40℃，在水中不停晃动冻存管，让细胞尽快溶化，待管中还有很小的冰粒时即可。( }7 J1 H) ~5 [; k, l' U% x( @
迅速拿到实验台准备操作。7 G' ?% `6 D' D2 u

: o* J! m& \# ?3 h6 B0 X: `; E) g你的“在显微镜下用台盼兰染色观察，细胞的活性是100%”，这个不太可能吧。
) s  V$ J. a: C* i  _* R3 W9 S9 @9 Z5 ?白色絮状沉物应该是胶原蛋白之类的东西。

jack063@163.com

+ Y( A) E$ b# u2 ]
    （l）从液氮中取出冷冻管，迅速投入37～38 ℃水浴中，使其融化（1分钟左右）。
2 g/ Q4 R+ x# D1 B    （2）5分钟内用培养液稀释至原体积的10倍以上。
1 y; f- k. @+ N; Y7 \4 M    （3）低速离心10分钟。) I% L2 r1 s) c- u" B5 z" h) V
   （4）去上清，加新鲜培养液培养刚复苏的细胞。. T: [6 o8 C5 c1 q* b. ~- B- ~. b

mayanfeng

复苏完毕到你离心洗涤的时间是多少,DMSO常温下毒性很强,通常是带点冰晶或者放在4度的冰水中

542177563

回复 刘艳85 的帖子# ]$ j2 e: L2 s9 r. ^7 v

$ H0 B' f2 I6 j2 p: x) _' ^$ z你好，我也是用的脐血，原本打算分离MSC和EPC的，可结果两个都没培养出来，可以把你的具体分离步骤发给我吗，谢谢！还有，我是坐地铁到很远的地方取的脐血，大概1h，因为没有血袋，我用的是5ml的抗凝管（平时科室里抽血用的那种），每个管子大概能抽3ml，路上用的是放有冰袋的泡沫盒装的。

刘艳85

用这种抗凝管应该没问题吧，平时取外周血也是这样做的吧。我分离的是MNC，没分离过MSC和EPC，可能它们的分离方法不同吧3 o. F# O7 t7 ~( r& X+ K4 f

mayanfeng

我猜是你冻的干细胞里面还有红细胞跟其他细胞吧,只是简单的脐血除去部分红细胞跟血浆冻存吧,这种情况下复苏的细胞红细胞是大部分破碎的,沉淀应该是破碎的细胞,显微镜下看百分之百是不可能的,你们用的看细胞的显微镜倍数不够,血稀释的程度不够,另外再去查查显微镜下怎么区别红细胞跟干细胞吧

542177563

回复 刘艳85 的帖子' D" x! e. S8 g$ f2 Q4 ~) K+ x
) G) F, k. M2 m# r
应该差不多的，你是怎么分离脐血中的MNC的呢？希望能分享你的具体操作步骤，谢谢！

刘艳85

1、离心，2000rpm，10min，分离血浆和血细胞；7 w0 N5 z$ ]7 @
2、去除血浆，血细胞与Ficoll分离液1:1混合，2000rpm，15min；
7 M, X0 ]6 u8 k3 j& h2 y1 ^8 x3、收获其中的白膜层，就是MNC，用生理盐水洗涤后获得。; s8 Y0 W) G% I! Z* u6 r
希望对你有所帮助。

刘艳85

大约半小时吧，这个影响大吗？我们洗涤两遍，想问一下，是不是在4℃的离心机中离心效果会好一些啊？这时候的温度比较低，DMSO的毒性可能不会那么显著