求助为什么有mES细胞的滋养层变密变多了

modou1001

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! g  J" s5 t+ ^- ^  |3 y对照一样的培养条件？  也是用的因子培养的？
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YYQ6301

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0 x5 Q' a0 `# e3 p是的  培养条件完全一样

精神病院小萝卜

你每次传代之前用gelatin把原先的feeder贴壁30min去掉试试，feeder又不会一代就死掉，不贴掉的话就是会越来越多的呀

igdb

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; @5 J7 b/ X6 @
7 }6 @  x: g7 k* g0 H你的feeder状态很不好了，ES克隆状态也很差，估计再传一代就会出现大量分化和凋亡。你的feeder保存多长时间了？我的feeder冻存一年后再用效果就很差了。

YYQ6301

9 P* @2 ]% a% D( \, I- b- ^2 C, I

+ K, e' \' ^9 ^: I/ o( A2 _- X; b2 x7 r: {. J* N
这两张图片上面是是传代后第四天，下面是第二天

YYQ6301

关于本帖的求助内容现做一个详细的说明，希望有经验的大侠们能够畅所欲言，谢谢' ]+ N- L/ E9 w  ?  h1 o
我们所培养的mES是从第十几代开始的，一开始培养的时候ES细胞比较正常，但是传过几次代以后，有类似于饲养层的细胞增殖，起初我们怀疑可能是feeder处理时间不够（浓度是 10ug/ml  处理时间为 2.5h ），于是再接下来的培养中就设置了不接种ES的饲养层的空白组，与ES同样的培养液（添加LIF 106单位 1:1000），又出现了同样的情况，但是空白组feeder只是变老，并不会增殖（空白feeder每天更换mES培养液 ，生长10天也不会增殖 ）。而且我们目前只是培养干细胞，不曾饲养其他细胞，所以现在不明白这个类似饲养层的细胞究竟是怎么产生的？并且为什么会在传过几次代后出现这样的情况？
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jianghaixiang

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" M3 w3 y+ r+ o: ~! B# F& Q* J, t* S; V
调整丝裂霉素C作用的浓度和作用时间

YYQ6301

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. F$ J( `5 ?' G/ Z5 p' w5 b2 Z回复 jianghaixiang 的帖子. w1 O+ ^& m& `) w- r, q. z
; j, D' w' T/ m9 {; h
你的意思是说还是feeder的问题吧   试一试吧  你觉得目前这种情况什么浓度和多长的作用时间比较合适

YYQ6301

大家都去周末了吗？偶需要你们的支持哈

songzxj

应该是mES贴壁后迅速增长，结果把周围的feeder推挤在一起，所以好像密度增大了。