求助为什么有mES细胞的滋养层变密变多了

modou1001

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- J7 n0 I6 t6 g* G& V) Y对照一样的培养条件？  也是用的因子培养的？  {8 @$ U8 }- U% m& m, x$ q1 H5 Z

YYQ6301

回复 modou1001 的帖子! U5 R. q- I: x

8 r4 Q6 m9 C- }. Z. s7 |3 A! P是的  培养条件完全一样

精神病院小萝卜

你每次传代之前用gelatin把原先的feeder贴壁30min去掉试试，feeder又不会一代就死掉，不贴掉的话就是会越来越多的呀

igdb

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  i# V8 t5 G2 ~. y
+ {$ C7 r; H# `) w; Y, \; ^$ V! l你的feeder状态很不好了，ES克隆状态也很差，估计再传一代就会出现大量分化和凋亡。你的feeder保存多长时间了？我的feeder冻存一年后再用效果就很差了。

YYQ6301

# l6 W9 k' F- w) N' p! @7 F: Q; Z2 g7 P) o! Q" ?5 W

1 ?: k% x; N6 n' f6 Y1 L4 M这两张图片上面是是传代后第四天，下面是第二天

YYQ6301

关于本帖的求助内容现做一个详细的说明，希望有经验的大侠们能够畅所欲言，谢谢  ?/ F4 e( P9 d
我们所培养的mES是从第十几代开始的，一开始培养的时候ES细胞比较正常，但是传过几次代以后，有类似于饲养层的细胞增殖，起初我们怀疑可能是feeder处理时间不够（浓度是 10ug/ml  处理时间为 2.5h ），于是再接下来的培养中就设置了不接种ES的饲养层的空白组，与ES同样的培养液（添加LIF 106单位 1:1000），又出现了同样的情况，但是空白组feeder只是变老，并不会增殖（空白feeder每天更换mES培养液 ，生长10天也不会增殖 ）。而且我们目前只是培养干细胞，不曾饲养其他细胞，所以现在不明白这个类似饲养层的细胞究竟是怎么产生的？并且为什么会在传过几次代后出现这样的情况？4 M4 R0 d, |5 G: @4 ~5 ^% N

jianghaixiang

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! \5 r/ G) X( P4 R8 _
2 W  i3 @- V5 h6 Q; M调整丝裂霉素C作用的浓度和作用时间

YYQ6301

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回复 jianghaixiang 的帖子6 Z1 v* `, e  ?3 n- Q5 V
5 K$ h* y  t2 O0 X1 w
你的意思是说还是feeder的问题吧   试一试吧  你觉得目前这种情况什么浓度和多长的作用时间比较合适

YYQ6301

大家都去周末了吗？偶需要你们的支持哈

songzxj

应该是mES贴壁后迅速增长，结果把周围的feeder推挤在一起，所以好像密度增大了。