5万左右的细胞用哪种抽提方法可以得到比较好RNA

sarah19860420

如题：5万左右的细胞用哪种抽提方法可以得到比较好RNA， 抽提1ug的RNA 需要的最少细胞量(MSC)大概是多少？

evial

qiagen的微量提取试剂盒可以做

sarah19860420

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) d! _1 w6 J7 A$ f# V: d" d' g& Q6 Q% n& e& I  ?* x/ s6 y+ a
昨天试过了，发现用30ul体积洗脱，结果得到0.5w， 1w，2w细胞的浓度都是4~6ng/ul，4w 是10ng/ul。觉得有点低。如果这样的情况，用trizol提会好点吗？

evial

用trizol吧，要用小柱子洗，柱子大了面积大损耗就多。最后洗一遍时可以多洗一次就是把珠子上的RNA洗下来，又可以多收集一些。如果后续不用杂交，可以用带有磁珠的柱子，micro试剂盒里的就是，如果要杂交的就只好用mini了

evial

用trizol吧，要用小柱子洗，柱子大了面积大损耗就多。最后洗一遍时可以多洗一次就是把珠子上的RNA洗下来，又可以多收集一些。如果后续不用杂交，可以用带有磁珠的柱子，micro试剂盒里的就是，如果要杂交的就只好用mini了

evial

还有前面操作要尽量减少RNA降解。

sarah19860420

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  t: j! U* W% Z7 w% q好的，谢谢您的详解，O(∩_∩)O~

fish_zbw1985

Qiagen有一款micro RNA提取试剂盒，可以提500个以上细胞的mRNA非常强大，不过用这个盒子反转录得到的cDNA也只能做很有限的Q-PCR

精神病院小萝卜

qiagen的74034试剂盒，专提微量组织或细胞，效果很好。

geminigg

按照公司的经验，试剂盒和Trizol各有优缺点，试剂盒的话，可能得率较低，但是质量较高，而对Trizol来说，得率高，质量低。一般情况下，虽然细胞少了点，仍然可以用Trizol提取，注意相应减少试剂用量，比如你用30rul洗脱，那肯定太多了，可以用15ul洗两次，这样的浓度肯定比30ul的高。