人原代脂肪干细胞培养不贴壁，求救！

alexsenla

最近分离培养人的脂肪干细胞，按照文献的步骤详细操作) Z0 C+ l- C" d
分离出来看到大量小圆型细胞，培养2天后只有极少数细胞贴壁  G6 U' R8 F4 J- h4 G6 ~1 C
现有如下问题：1 D* v( t  S8 N! r0 Y
1：是否必要用红细胞溶解液？网上观点不一，而且没有找到现成的红细胞裂解液。
, f: I- b. f: ^" }/ ?8 E: l2：脂肪干细胞不贴壁的原因是什么？我们用的hyclone的培养液+10%hyclone的血清。
/ i. Z/ J  L% g* H. W! Y1 M2 J3：用胶原酶溶解组织的时间多久为佳？我们用的0.075%sigma的胶原酶，按文献的半个小时溶解得并不理想，要延长至60min才能见到糊状的组织。溶解时间过长是否影响细胞贴壁？  T& T. a1 \/ C1 e+ K. l5 e; }; T
4：细胞接种的密度多少合适？之前都没有计数，大概在高倍镜下可以见到10个左右的细胞，后来就越来越少。/ ?$ o" T  n8 H5 K+ m
离心速度是800rpm  5min6 E. p8 v  B3 w
) t$ W$ K* f- ]8 H$ x# l! i7 ]
真心请教，请高手们帮忙！

luckywen

不知道你的细胞培养板选择是否合适。

alexsenla

培养板使用的corning的，还有什么讲究吗？刚开始接触细胞培养，需要学习的东西太多

初学者

路过，我也是新手。加油啊

细胞海洋

回复 alexsenla 的帖子
0 n! C# r' ^. `+ b( \
* z  H( }7 ~2 ]' m! Q你询问谁 就点击对方回复帖子中的回复按钮 然后输入内容 像我这样, B% \; p9 Y+ O9 v3 ~

" T- n& G4 H/ Z" s3 @% }' r* C& O" m: i否则他看不到你的提问

Demon_CN

脂肪间充质干细胞
6 F: s; M) x6 l: t8 c1、一般抽脂的时候需要把脂肪颗粒打碎，方便消化
7 G" V# O, K* h' E2、向有脂肪组织的试管中加入与组织量相同大约5ml左右的消化液（胰酶，I型胶原酶，以1：1比例混合配制而成），将试管放入37°C恒温摇床中震荡消化30min。8 u7 |% }9 N6 Y1 x6 w
3、分层取单核细胞群3 [6 L2 @& m" N- J( m
4、接种密度大概10000cells/m2* t7 s6 \! x4 V
注意耗材的选用，我们实验室一般用经过TC处理的康宁培养瓶，有助贴壁