求助啊！慢病毒感染问题！

YLL824WAN

    本人在做慢病毒感染目的细胞HUVECs，实验组慢病毒包装有两个转录因子，对照组是慢病毒包装的空质粒，其余条件都相同。之前预实验已摸出MOI值，且当时96小时时观察到了荧光。今天又去看荧光，结果对照组荧光特别漂亮，转染率几乎100%，而实验组却基本看不见荧光，仅有少量零星的亮点，完全不见细胞轮廓。本人真的很困惑，操作及试剂都是一样的，望高人指点迷津啊！不甚感激！

lxm5668

根据我的教训，分析可能两种情况，仅供参考：
; a9 E6 V' J+ d/ w, w& B/ o1.被包装的质粒出现了问题，之前测过序或在细胞中检测过表达情况吗，即使在这些都做过的情况下，提取质粒也能出现问题，将待包装的质粒重新检测其表达情况；
, g! _" y4 V  w; M' z! E. X2.做病毒包装时，实验组出现了问题，或许哪个组分忘了加进去。

linzi214

会不会是装载两个转录因子导致质粒比较大，增加了转染难度。或者如楼上所说，插入的片段序列是否正确，能否正确转录翻译。

YLL824WAN

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1 n- j9 K2 G2 s. {
( a* P5 @! G* H应该不会啊！我之前两次预实验都有荧光表达的，这次操作什么的都是一样的，不知道为啥就没有……

YLL824WAN

回复 lxm5668 的帖子0 _: B0 l# A) U3 s

7 I+ O2 g: @. t$ A6 @, ~+ e我之前两次预实验都做出来荧光的，应该没问题的。这次我都做得很小心，没有漏加什么啊！5555

wangsandan0503

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; \1 c1 v9 Z" H4 E9 I' g: `5 l: F/ ?
没有说清楚，是转染，还是感染？据你描述应该是包装好的慢病毒，然后感染目的细胞，出现这样的问题，原因：
; U. d, [) @& ~8 G- s* Z1细胞密度太大，细胞状态不佳。. v2 w! _5 e6 P& Q% p
2慢病毒表达载体加的两个因子片段如果太大，会影响感染效率。

YLL824WAN

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$ v) `9 H* i: e4 s
; `4 U6 c; g0 p* j. s! Z7 L是感染，我是按30000~50000/cm3的密度接种的啊！好吧！那我下次再种稀点试试，谢谢哦