浓度为0.1%的I型胶原酶的配制详细方法，高手请多指点

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. g# N/ B! |* X# n, w+ G% I( \' S) l) F8 U- u( L
大侠你好，“0.2微米滤器”你能不能介绍下它的详细资料和操作步骤。我上次就是直接用PBS溶的，结果15ml离心管里面呈现淡褐色的混悬液，也没有过滤就直接加进去了。怕是漏了重要的一步。

jkfly

PBS和培养基配都可以，我是PBS配的，时间我每次的时间比文献的短，37℃半个小时

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' F% |. k) f' }$ V: U4 G# ]
3 _* A6 k8 g8 H' @具体有没有就是消化到可以的时候，里面脂肪组织的一些客观的指证，比如像形态、色泽什么的一些就是消化完全的一些指正？另外是都需要过滤吗？37度是就单纯放置在培养箱还是恒温振荡？

zz091115

胶原酶保存条件是4度 别被楼上的给忽悠了 0.22um滤器过滤下 PBS也能配 但是主要考虑到在培养基配制时候细胞存活环境会更好一点

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( W' M" G" ?1 x5 d7 M+ @8 K3 j$ a: Z1 y* I
胶原酶不是在-20度保存吗？你说的保存条件是4度是说的配好后存放于4度冰箱吗？

jkfly

回复 相宜 的帖子! Q7 r$ ?2 K, T8 g) k/ `( m/ g/ L

& |; J/ Q, ^# w. `, p. I1 n我看国外protocol是要震荡的，我自己是15分钟去晃一下，放在培养箱里的，我觉得还是震荡的好

jkfly

回复 相宜 的帖子! j5 t/ }$ X0 f
4 k0 D$ ?7 C. f  M
4℃应该是粉剂，我们也是放在4℃的，配好后也是放4℃冰箱。一般用2周后再重新配。

相宜

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$ M% O' H9 \2 H2 {# V- f& Q
+ r/ S% R7 i& o0 a7 n; u啊 我就把粉剂放在-20了，配好分装后也是放在-20里面，那你说会不会受影响呢？
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dxldeyou_2006

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$ Q6 P* @( J3 q" B# c) g. z" R, [+ s4 Q
100ml里0.1g

your1024

回复 相宜 的帖子* J, K2 J1 C, z' L

: h1 x5 u3 f' E; P粉剂的配制是质量体积比，g/ml，所以0.1%就是0.1g的胶原酶配上100ml的液体，可以用PBS，也可以用含血清的培养基（Ⅰ型此法少见，主要用于Ⅱ型等消化较难消化的组织如软骨等，可消化过夜，并不用担心血清影响消化能力的问题）。配制时，可以分装到青霉素瓶里，不用的-20℃保存，用的时候拿出来37℃融化，尽快用完。消化时间40min~1h，观察大组织块消失，消化液呈糊状即可。