浓度为0.1%的I型胶原酶的配制详细方法，高手请多指点

相宜

本人为刚提取脂肪干细胞的菜鸟级别，查阅文献说是用浓度为0.1%的I型胶原酶，单位为mg/l.    1000ml的DMEM/F12 应该溶多少mg的I型胶原酶呢？我买的是100mg的粉末状的I型胶原酶。另外用F12配合适吗？要消化多少时间呢？

zz091115

F12可以配 消化时间看你消化温度 37度1-2小时 4度过夜（只是见过自己没试过）

niyou

关于楼主的问题我的回答如下：3 C; E7 X( L" f0 Y8 n  h
一、我做过人，小鼠和大鼠三个物种的脂肪干细胞，都是用0.1%的I型胶原酶消化，消化时间是1小时，这也是nature protocol上推荐的浓度和时间；# O2 T! W$ A8 E0 K  M! `: o
二、另外，关于0.1%的I型胶原酶的配置，100mg的粉末状的I型胶原酶可以溶于100ml的DMEM/F12，0.22微米滤器过滤；最好现配现用，效果超好。8 p* W$ z1 r3 ?. |. G
三、请注意请根据你所需要的0.1%的I型胶原酶溶液的体积，然后称取适量的粉末状的I型胶原酶进行配置，一般要求是0.1%的I型胶原酶溶液的体积是你所取脂肪体积的3-5倍。例如6毫升脂肪用0.1%的I型胶原酶溶液30ml 进行消化，那么你需要称量30mg的粉末状的I型胶原酶可以溶于30ml的DMEM/F12中。

冰枫de梦

用PBS配制就可以吧，去年我都这样做了半年了，还可以。

相宜

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: O( x) g  c/ H
3 T0 `# R, I' C, Y: F大侠，37度1-2小时是在培养箱中消化还是在恒温振荡箱中消化呢？

相宜

回复 niyou 的帖子5 ]" h0 ?5 k* X7 k" n- O# f

! B7 O$ w) r  a7 ?非常感谢高人指点！但是我对0.22微米滤器的没有概念，我今天去实验室问下。高人的回答非常详细，非常细心，谢谢

相宜

回复 冰枫de梦 的帖子  r  F3 F& B4 T2 W1 y8 J0 t
6 T; s/ z$ a3 Z. I: k6 `, T* j
我第一次用的就是PBS配的，可能是自己刚入门吧 我在试试

冰枫de梦

回复 相宜 的帖子5 r  I  L7 y; E  ~

  m: Y  d/ K+ c9 A' N0 |在恒温振荡水浴锅中消化就行，不用一小时就能酶解得很好，看消化液变的很浑浊了上面漂着一层油滴就可以了。

冰枫de梦

胶原酶现用现配太麻烦了，可以配多一些分装的灭好菌的青霉素小瓶里，放-20度冰箱保存；用时提前一小时拿出来解冻就行了。

B1228

niyou 发表于 2012-4-6 07:25   d1 A8 B: ~8 |) `% h! n4 P
关于楼主的问题我的回答如下：  A7 j8 C' \5 T  G9 `
一、我做过人，小鼠和大鼠三个物种的脂肪干细胞，都是用0.1%的I型胶原酶消化 ...

1 [7 X$ c( `  Q& R30mg I型胶原酶 溶于 30ml 培养基， 那这个浓度是怎么算出来是0.1%的啊？？？ 求解！！！