最近在做肺癌细胞原代培养效果不理想，请内行指点

huanghao4

最近在做肺癌细胞原代培养，开始用小牛血清，细胞长势不好。后来换成胎牛血清结果还是不理想。请各位前辈指点

huanghao4

请博主抛砖引玉，急！

wagumaxida

huanghao4 发表于 2012-4-12 06:58 . @+ O, V5 ?% g
最近在做肺癌细胞原代培养，开始用小牛血清，细胞长势不好。后来换成胎牛血清结果还是不理想。请各位前辈指 ...

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原代培养刚开始都长得比较慢，可以参考以下几个要点：快速操作，温度不要太高，消化酶浓度和消化时间要适度，可考虑多种消化酶并加入一点保护液，细胞密度也要适度，太稀的话不行，最关键的是培养基是否合适，理论上说只要培养基足够好，操作的稍微差一点都没有问题的

jack0811

话说我是机械法的...组织不能剪太碎,用培养液重悬好之后种到包被好的皿里,要均匀分布,培养液不能多,要让组织块沉到地下有助贴壁,第二天来看贴壁了没有,稍微加一点液不要让它干了,贴壁之前都要小心观察小心加液,组织块贴了之后可以加稍多培养液等细胞发出来

sjmpt

关键是选择合适的培养基，我目前在做肿瘤成纤维细胞的原代培养，我直接将肿瘤组织用手术刀片一点一点的挂下来，再通过细胞粘附能力不同反复传代分离。总结下来，肿瘤细胞比成纤维细胞好养，关键是选择合适培养基，合适的接种密度，培养基中要加双抗。

wcfeng88

有个朋友还习惯额外添加5%的人AB血清，效果似乎不错，可以尝试一下。

xiaojudeng

sjmpt 发表于 2012-5-4 22:41
( y, m% R6 a8 n关键是选择合适的培养基，我目前在做肿瘤成纤维细胞的原代培养，我直接将肿瘤组织用手术刀片一点一点的挂下 ...

0 I  |6 b5 e! K) S+ s5 w$ `+ ~
请问大神用的是什么培养基，我都不太成功，培养出来都是fibroblast

细胞海洋

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