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查看: 47260\|回复: 14	go 关于MEF饲养层，急急急！ [复制链接]

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楼主

发表于 2012-4-15 22:54 |只看该作者 |倒序浏览 |打印

本人最近实验频频出问题，很是烦躁啊！望高人指点：之前用昆明白做的MEF饲养层细胞，养到第三代时用丝裂霉素C处理后冻存，用的是60%DMEM+30%FBS+10%DMSO，最近复苏了9管，只有5管贴壁，另外4管一点都没贴，肉眼观可见培养基呈黄色浑浊，还可见白色小絮状一样的漂浮物。给贴壁的5管换液后开始每天收集条件培养基，可才到第4天，培养皿中培养基镜下看全为泥沙似的东西，很细密，细胞形态也变得不一样了，肉眼观也是黄色浑浊一片，用PBS反复洗了4次后换液，第二天又成那样了。后来又复苏了两次，也都是不贴壁，但这些细胞不是一次冻存的，而且冻存方法应该没问题，真的很不解啊！各位大侠都来指点一下哦！感激涕零啊！

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沙发

发表于 2012-4-15 23:39 |只看该作者

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细胞污染了

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藤椅

发表于 2012-4-15 23:46 |只看该作者

细胞污染了

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优秀版主金话筒优秀会员帅哥研究员小小研究员

板凳

发表于 2012-4-16 07:06 |只看该作者

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建议你还是不要冻存了，现用现弄吧，养一代取出一些杂物质，直接接板子加丝裂霉素，本来这玩意儿就只能生长几代，冻了复苏死一批，就没什么好用的细胞了。

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优秀会员

报纸

发表于 2012-4-16 08:53 |只看该作者

首先冻存时为保证存活率，尤其是MEF和ESC这样较为脆弱的细胞，建议将血清浓度加大，我们一般冻这些细胞时用90%的血清和10%DMSO。其次，你说培养液浑浊而且换液后没有改善，应该就是污染了……

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优秀会员美女研究员小小研究员

地板

发表于 2012-4-16 08:58 |只看该作者

我遇到过，细菌污染

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懵懂干细胞

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优秀版主帅哥研究员积极份子小小研究员金话筒

7楼

发表于 2012-4-16 09:07 |只看该作者

黄色浑浊一片应该是污染了不贴壁原因很多

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8楼

发表于 2012-4-16 09:59 |只看该作者

注意了，肉眼观浑浊，镜下黑点泥沙状，可能是冻存时被细菌污染了。

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金话筒优秀会员

9楼

发表于 2012-4-16 13:55 |只看该作者

细胞污染，建议全部清除！做好除菌准备！防止大规模扩散

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10楼

发表于 2012-4-16 15:06 |只看该作者

啊？？？完了……好的，谢谢各位啦！我赶紧处理去。

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