实用小方法：细胞培养时精确调整细胞浓度

luckywen

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    细胞培养、传代时经常会涉及到细胞浓度的调整问题，看似很小，却很难精确。
# B) K0 Y9 U% ?- e: A    其中有两点是比较重要的，第一点明确细胞总量，可以用细胞计数仪，或者计数板计数细胞；第二点按照所需细胞培养浓度计算培养液体积，离心细胞后用相应培养液重悬细胞，平均分配到细胞培养板中即可。

biotly

重悬的时候最好先小体积把细胞重悬起来，再加如另外的培养基混匀，否则细胞不容易吹散~

zz091115

貌似大家都是这么做的吧 没啥特别的技巧吧

changbo529

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' M) S' s' b  `: x6 |4 {5 G( ~如果是细胞球的话很难计数呀，我上次用计数板计数时整个视野下就一个细胞胞而且还不在计数范围内，这该怎么办？! P* [  }: n1 `" }' `

your1024

回复 luckywen 的帖子4 }( f' W2 {+ w: k8 e
, ^* x7 `3 w3 l$ A
请问您说的实用小方法是啥？除了这两点还有吗？

llingzu

如果用计数板的话，计数前细胞一定要混匀了，否则计数误差很大的。
! G8 A: h) E! N而且细胞也要尽量消化成单粒的

luckywen

回复 changbo529 的帖子8 x& f  L+ n+ G& E! k# o0 g9 f. c' t

- W0 P# G: c5 E# T不知道是不是稀释倍数太大了，一般24孔板一孔细胞加1ml,离心后重悬细胞，一定要吹打混匀。

luckywen

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yyshpy

都是这么做的，细胞计数比较麻烦，所以现在做上两次以后，凭着经验就可以了，而且不同的细胞株需要不同的处理，不可能都一样的，所以这个试验要求定量就比较难了，积累经验处理就能做很好的

ouyi2738

??小方法呢？？？%%%%细胞计数也不麻烦，习惯了很快的2分钟就搞定了。还有貌似你这方法也不准吧，计数完再离心会损失一部分细胞的，对于少量的细胞结果很不准。我们都是离心完再计数，经验了看沉淀就能知道差不多加多少培养液重悬了。刚开始可以用很少量培养液重悬，取100ul出来稀释10倍再计数，这样可以避免培养液加多还要再次离心，也可以避免计数时细胞过多。计算完体积分细胞前一定把细胞vortex均匀，操作时间长要随时混匀细胞。