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我认为你的实验细节很重要，下面的细节你注意到了吗？/ G# ~" a$ {. U- s6 @) g" ]9 F- G
血清的处理
% H& o% b3 X+ x! a$ j 市场上出售的血清一般做了灭菌处理，但在使用前还应做热灭活处理，即通过加热的方法破坏补体(近来也有观点认为热灭活处理是不必要的)。
( @) A! \, }. W' v2 J9 l* }3 I1 _ Z 胎牛血清不必灭活。6 \; s" b7 M% X& w8 a) p6 t+ k; @
1、 将血清加热至56℃并保持30 min，其间要不时轻轻晃动，使受热均匀，防止沉淀析出。
$ N: {. Z; g2 f6 Q2 y5 _ 2、 处理后的血清贮存于4℃。+ M& V2 K0 t9 b( g* O
3、血清在使用前最好进行筛选以掌握血清的质量。 # e/ W, T% q- w2 u& R6 ^- C/ B
玻璃吸管和玻璃培养瓶的消毒:1)高压蒸汽灭菌15分钟以上;2)干烤消毒140度2小时以上; ( o% o- g2 o s
无菌工作台先清洗后用75%酒精擦拭干净，紫外线照射40分钟以上;各种培养板照射3小时以上; ' O7 e# `; M ]- l7 j8 Z
培养基(pH7.2)和血清配制好后要做无菌试验:将血清按10%加入培养基内，用无菌的玻璃离心管或玻璃瓶取完全培养基5-10ml置培养箱内培养2-3天，肉眼见无浑浊或沉淀等异物。分装后置4度保存;
! l9 H* D( ?8 q& C8 r/ L( m4 T 消化液(pH7.8)或其它加入液，应用高压蒸汽灭菌或一次性无菌滤器过滤除菌，分装成支置-20度保存;
& I. ]- k- ^$ w& u: z7 ~6 } 培养箱应先用清水清洗后用75%酒精擦拭一遍(如有紫外线的应照射1小时以上，如有高温灭菌的应按程序来菌)。至少每月一次。
8 O U' L X2 [0 m1 r 生长培养基的配制
( B; a0 o% D, Z 除无血清培养之外，各种合成培养基在使用前需加入一定量的小牛血清或胎牛血清和抗菌素。+ `& x% h4 u7 ~! w
培养基分装成小瓶(100～200 mL)以便使用，翻帽塞塞紧瓶口。
& O1 c, \! p( z- I2 C& o5 O$ u8 V 按如下比例配制： 基本培养基占80％~90％，小牛血清或胎牛血清占10％~20％。 按1％体积分数加入双抗贮存液(青霉素+链霉素)，使青霉素和链霉素的终浓度分别为100 U／mL。
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发表于 2012-4-25 13:25
发表于 2012-4-26 00:42
