有没有哪位高手能提供一些从抽吸脂肪中提取ASCs的实验具体操作步骤呢？谢谢大家了

相宜

我们是整形外科，平时大部分脂肪来源都是从抽脂术中得到的，但是我只是见过别人做的手术切下来的脂肪，所以对前期的实验具体操作是个很大的障碍，哪位高人能指点一下？

pailishi

抽脂的处理更容易吧，用DPBS洗涤，离心 ，取上层的脂肪，重复几次，然后用酶消化几个小时，收细胞就OK 啦

相宜

回复 pailishi 的帖子- E% N4 x7 d6 U* Q7 [

# F! o& A: j" f% tDPBS？用PBS洗涤行不行呢？洗几遍呢？离心的速率是多少呢？要取上层的脂肪重复离心几次呢？0.1%的I型胶原酶消化几个小时呢？是静置消化还是放进恒温振荡箱中消化呢？谢谢了

ytumuyangren

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9 r! F; C! I$ C! L用PBS洗也可以，我们一般是用D-Hanks洗，洗三次，目的是稀释麻药；加入0.075%的I型胶原酶于37℃的摇床消化1h，1200rpm离心10min，去除上清和未消化的组织；用培养基重悬沉淀转移至一新的离心管内，1200rpm离心5min，重复三次；此后就可以将分离到的ASC接种于培养瓶内培养，前三天不要动培养瓶，以后酌情为细胞更换培养液。

ytumuyangren

我也是最近才做的，查阅了很多资料，这样做能养出来ASC，希望现在的回复对你的实验有所帮助。

cartoonyang

ytumuyangren 发表于 2013-4-16 20:40 , U: R! z+ |% b3 j+ P! [
用PBS洗也可以，我们一般是用D-Hanks洗，洗三次，目的是稀释麻药；加入0.075%的I型胶原酶于37℃的摇床消化1 ...

  V; N1 s* d9 g3 @( l* h0 H
前三天都不换液，那如何保证你的细胞就是人ASC？

zhangjieyctc

分离后，最好24h换液，去除红细胞和碎片

ytumuyangren

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通过传代来纯化细胞，ASC还是比较容易消化下来的，第三代后细胞就已经很纯了，后续还可以进行成脂、成骨诱导进行鉴定，当然也可以通过流式检测。

cartoonyang

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* M/ o2 K- b# J6 G: {回复 ytumuyangren 的帖子
/ V/ m7 i+ A8 {0 ]" B0 D& U- D6 x0 x) B0 B0 C
通常都要24内换液去除红细胞等，你的这个方法细胞获得率肯定更高？还有，如何知道已经去除了成纤维细胞？？？

ytumuyangren

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: {* O, j2 }  z这种方法我不敢肯定得率是最高，但是经过我们多次的尝试，得到的细胞经过成脂成骨诱导鉴定，其具有多潜能性。成纤维细胞一般是不增殖，而且其不易被消化下来，通过传代可以除去成纤维细胞。实验采用的细胞是3-5代的细胞，当然如果你怀疑得到的细胞不是你所需要的，可以进一步通过流式的方式来鉴定。欢迎一起讨论，大家一起进步。谢谢。