载体线性化

LQAI2012

在做真核细胞转染的稳定筛选和转基因的过程中，在转染之前将构建好的载体进行线性化，有助于目的基因整合到细胞的基因组上。& U) R" W7 _4 L

4 M0 S8 ]: Z" x5 h$ U, P在此，想向大家请教一下，载体线性化的方法，如对载体进行限制性内切酶切割可以吗？  G' Y" H7 O$ [9 g
载体线性化后，转染效率会受到影响吗？
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还有些什么需要注意的？

懵懂干细胞

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- _* B: \2 w+ U4 j0 I' H! J我一般就是用酶切，单位点，不在必须元件序列中的酶切位点，对后期的重组没有影响才行

LQAI2012

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  }3 B$ A: O5 m- e9 X+ O6 O' \: G$ f
嗯 谢谢, j  K4 n2 J6 C) r) C7 y2 I: E' W
貌似都用酶切呢
0 g$ }5 C0 r$ T# }3 o/ g9 `, \4 l# h6 o  W* D2 O' ~* U
那线性化后，对转染效率什么的会有影响么？如果是细菌转化的话，线性质粒比环形质粒成功率会小很多诶。当然，这两者外源DNA的进入方式不太一样，所以问一下~？

zack

一般的，做DNA显微注射是需要线性化质粒的。酶切掉不必要的原件；也可以用单酶切位点。6 m$ V( A- A5 l; Y4 O: E' |' R& f$ }) @% U

1 w0 x& r; w2 \  c! M如果是体外实验，线性化后肯定对转染效率是有一定影响的。