关于脂肪间充质干细胞

举锅

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4 ^% q. K- g- o
最近养了脂肪间充质干细胞，贴壁养很难消化，有木有高手养过提供一点经验啊，多谢！！！

aibi1983

我一直都在养脂肪间充质细胞，不存在难消化的问题，估计你的细胞老了或者更本就不是脂肪间充质细胞
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xuyang0317

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/ z4 y2 r$ ^! A: R4 I7 c你可以试试37°C，胰酶消化的效率会大大增加，胰酶多少会对细胞有一点伤害，消化时间不能太长，胰酶消化后，用1ml枪吹。( G2 T( P( ]) Q) w. o3 d
现在细胞消化大概归为两类做法：/ j# k. c. K4 k& \8 T: y- p% C6 X
一种就是需要离心的，即弃培养基，PBS洗，加胰酶消化，待细胞呈流沙状往下流的时候加新鲜培养基终止消化，吹打下细胞，离心收集细胞，重悬之后分瓶培养。
$ E9 r/ Q  H8 i2 Q9 L) L( K  e' j# @ 另外一种就是不需要离心的，具体做法就是胰酶消化的过程中镜检，待细胞变圆，细胞间隙变大的时候，弃胰酶，加少许新鲜培养基，吹打下细胞，分瓶培养。
3 _1 e( n- T- X' q; M4 ]% S 其实两种方法各有利弊，这里谈谈两者的缺点：4 n6 Z1 W/ y* L4 b0 u5 V- x
第一种，消化的时间会相对久一点，细胞基本上从壁上完全脱落，这样就有个问题，时间把握的不好细胞很容易消化过了，大家也知道，消化过了对细胞的损伤是很大的，可能细胞会从此一蹶不振，也有可能传几代就老化了，细胞形态发生了变化。8 n% o0 Y8 E* X# ]6 z1 H
第二种方法相对来说在消化的时间上比较容易把握，但是这种方法却走向另一个极端，即细胞可能消化不完全。其实细胞贴壁的牢固程度是相对的，有的细胞贴得紧，有的贴得松，在胰酶消化的时候，贴得松的先下来，贴得紧的后被消化下来，这是一个连续的过程，并不是所有细胞同步的被消化下来，有时发现细胞变圆，有些细胞已经脱落游离在消化液中，以为已经消化好了，弃消化液，加新鲜培养基吹打，结果发现很多细胞很难吹下来，如果吹得次数过多，用力过大，即使细胞被吹下来，细胞所受的损伤也是很大的，这样传代后的细胞状态肯定不会好到哪里去。所以没有办法，如果发现细胞消化不完全，只能收集已经消化下来的细胞，PBS洗后再加胰酶重新消化，这样增加了实验操作，不仅多花了时间和精力，同时也增加了细胞污染的几率。
0 `5 j$ Q5 C9 r2 w5 I! ] 当然，每个人在消化细胞的时候都有自己一套诀窍，比如有的同学加胰酶后只让胰酶润湿细胞后立刻将多余胰酶倒掉，让剩余在瓶中的胰酶继续消化；有的同学会在消化一段时间后轻拍细胞培养瓶，将一部分细胞先拍下来，以缩短消化时间。

cjhpumc

如果原代就很难消化的话说明你的分离方法有问题，得到的不是MSC

guochutao

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这种干细胞很好消化的，估计你分离得到不是脂肪干，有可能是巨噬细胞这样的白细胞。

rongrong

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( _, e6 M/ A( `! c+ h* _$ S
7 H: |, _( {( Q# y" Q能否分享下你的脂肪间充质干细胞是如何分离的？谢谢，我们也想做这方面的工作，但是有点不知道如何下手？

rongrong

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" Z6 J" ?9 k6 e9 r4 P能否分享下你的脂肪间充质干细胞是如何获得 的？

举锅

回复 aibi1983 的帖子# f) |8 I" x7 O. D; M  f7 V; D

: A3 B) ?' m0 n$ t6 z& a! V额，因为也养过脐带见充值细胞嘛，那个就很好消化啊常温三分钟足够了，这个脂肪的形态跟脐带基本上一样的啊，但每次消化都要在37°消化七八分钟左右。也就只养了三天吧，应该不存在老化了吧。能请教一下你的经验不，多谢！！！

举锅

回复 aibi1983 的帖子4 y2 T' X+ |; B6 U7 w
) E+ M9 B6 i7 o) d
额，因为也养过脐带见充值细胞嘛，那个就很好消化啊常温三分钟足够了，这个脂肪的形态跟脐带基本上一样的啊，但每次消化都要在37°消化七八分钟左右。也就只养了三天吧，应该不存在老化了吧。能请教一下你的经验不，多谢！！！

aibi1983

回复 rongrong 的帖子7 g) l3 j' ^; o4 H
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您好，不知道您是想做动物的脂肪间充质细胞还是人的脂肪间充质细胞。我发表了一篇文章在《中国组织工程与临床康复》杂志，是2011.15卷14期2512-5，您可以看看，若有不明白可以交流