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回复 举锅 的帖子/ ~% i1 t- ~+ r6 i
4 Y1 C* J6 M9 B9 b- V2 \ F你可以试试37°C，胰酶消化的效率会大大增加，胰酶多少会对细胞有一点伤害，消化时间不能太长，胰酶消化后，用1ml枪吹。& S @6 ?2 ^ g$ ^$ N" A/ s' N. X% ~6 I3 ]
现在细胞消化大概归为两类做法：
. q. G, S. K: Z( h! }: f4 L4 ~ 一种就是需要离心的，即弃培养基，PBS洗，加胰酶消化，待细胞呈流沙状往下流的时候加新鲜培养基终止消化，吹打下细胞，离心收集细胞，重悬之后分瓶培养。5 e" f' w% L# E J5 ?
另外一种就是不需要离心的，具体做法就是胰酶消化的过程中镜检，待细胞变圆，细胞间隙变大的时候，弃胰酶，加少许新鲜培养基，吹打下细胞，分瓶培养。, A5 V! _4 A4 u
其实两种方法各有利弊，这里谈谈两者的缺点：
0 ^& I3 H" X7 } 第一种，消化的时间会相对久一点，细胞基本上从壁上完全脱落，这样就有个问题，时间把握的不好细胞很容易消化过了，大家也知道，消化过了对细胞的损伤是很大的，可能细胞会从此一蹶不振，也有可能传几代就老化了，细胞形态发生了变化。
% j" F# G1 }8 G6 X4 \8 _ 第二种方法相对来说在消化的时间上比较容易把握，但是这种方法却走向另一个极端，即细胞可能消化不完全。其实细胞贴壁的牢固程度是相对的，有的细胞贴得紧，有的贴得松，在胰酶消化的时候，贴得松的先下来，贴得紧的后被消化下来，这是一个连续的过程，并不是所有细胞同步的被消化下来，有时发现细胞变圆，有些细胞已经脱落游离在消化液中，以为已经消化好了，弃消化液，加新鲜培养基吹打，结果发现很多细胞很难吹下来，如果吹得次数过多，用力过大，即使细胞被吹下来，细胞所受的损伤也是很大的，这样传代后的细胞状态肯定不会好到哪里去。所以没有办法，如果发现细胞消化不完全，只能收集已经消化下来的细胞，PBS洗后再加胰酶重新消化，这样增加了实验操作，不仅多花了时间和精力，同时也增加了细胞污染的几率。
- W. x% O4 K4 c f8 l 当然，每个人在消化细胞的时候都有自己一套诀窍，比如有的同学加胰酶后只让胰酶润湿细胞后立刻将多余胰酶倒掉，让剩余在瓶中的胰酶继续消化；有的同学会在消化一段时间后轻拍细胞培养瓶，将一部分细胞先拍下来，以缩短消化时间。 |
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发表于 2012-4-26 16:43
