有关DC细胞治疗的问题，请大家帮忙解决困惑

lunyuyuanxj

现在许多医院都在广泛宣传应用DC或DC+CIK治疗肿瘤，大量文献也有报道说DC+CIK治疗效果更显著，可是我有些困惑，希望大侠们不吝指教：$ \/ [3 Q2 g7 i, w5 P
1、DC从分离培养和扩增，我培养过多份外周血，有的样本贴壁细胞很多，培养较容易，可是有的样本贴壁细胞很少，请问这种情况下大侠们有没有更好的方法使其在短期内有较大的扩增达到治疗需要的剂量呢？- p, g! }0 G3 [5 g5 a
2、多数文献所说的效果较好都是应用了与肿瘤相关的某种抗原负载，而在实际临床应用中如何得到这些抗原呢？针对肿瘤患者本身肿瘤的抗原在手术后可以实现，但数量有限且不太可能重复使用；那么是用肿瘤细胞系还是某种相关的多肽，或是用其它的什么呢？0 j  ^0 c, f. Z4 u
3、如果没有负载抗原，经过培养的DC如何提高疗效呢？我们知道DC在未成熟时摄取抗原能力强而抗原提呈能力弱，而在诱导成熟后则相反，我想知道临床应用的DC是哪个阶段的细胞呢，如何发挥其肿瘤治疗作用？
. Q; A% H4 O6 W- P$ G5 E3 L" ?请大家多发表意见和见解，谢谢！

jack063@163.com

我们目前主要从事免疫细胞的治疗，针对于你所说的第一点：“1、DC从分离培养和扩增，我培养过多份外周血，有的样本贴壁细胞很多，培养较容易，可是有的样本贴壁细胞很少，请问这种情况下大侠们有没有更好的方法使其在短期内有较大的扩增达到治疗需要的剂量呢？”我们一般在培养之前会提前加一些包被液和细胞刺激因子进去，前期在T25瓶子里细胞贴壁少的话尽量多延长观察几天长到适当的时机补加刺激因子转到2个T25瓶子里，成本是大了点但是效果还是不错的。

andylee824

我也在做，加一些包被液和细胞刺激因子？都含有什么成分，嘿嘿

大少爷

临床应用的DC是诱导成熟后的。体外诱导DC细胞——DC细胞负载肿瘤抗原并与自体的淋巴细胞混合，刺激自体T细胞产生细胞毒性T淋巴细胞——将这些细胞毒性T淋巴细胞，通过静脉回输给病人——直接杀伤肿瘤细胞。
/ l1 }1 t! G' D2 H: ^+ A
: H' R! ~; h7 g: A2 o. @( Y7 ?如果没有负载抗原，经过培养的DC如何提高疗效呢？这个我还真不知道，我也很疑惑。有人跟我解释说是DC促使CIK分泌相关因子，来杀伤肿瘤细胞。不太可信。

lunyuyuanxj

回复 jack063@163.com 的帖子' K7 |5 `0 J7 @5 c9 d/ P% K% A( ?
$ V- r8 m7 Y+ w0 E. }6 `4 D' R$ i
我通常是在培养时加入可溶性IL-4和GM_CSF，你所说的加包被液和细胞因子是什么呢？能不能把你的方案提供给我试试？谢谢

zuming

你的第一个问题jack063@163.com已经回答了，我来回答后面的吧
7 w3 X" |6 M; R* N- G' s问题2，实际临床上的确很难获得足够量的患者肿瘤抗原，这时可以考虑转染的办法，将肿瘤的特异性抗原转染到DC中，让其稳定表达即可。操作比较麻烦，但一旦构建好了转染系统，可以反复使用，总的来说还是很方便的，效果也更好。
! H7 m! s; S8 f( G/ F问题3，通过以上办法，问题3也就不是问题了。

lunyuyuanxj

回复 zuming 的帖子# K; F3 [3 ]2 ~- C8 U2 F

$ w8 t$ T! u3 P谢谢你的解答，不过转染我这儿目前好像无法实现，。有无其它技术含量低点的方法呢？

zuming

回复 lunyuyuanxj 的帖子
$ Y+ {; t( n6 R  K% W. A
$ c7 q4 _  J. F0 U1 g3 i2 \用纯化或重组的肿瘤特异性抗原多肽致敏DC也可以，不过现在这种多肽确定的不多，所以适用性不够广。

lunyuyuanxj

回复 zuming 的帖子, G) D' \; ?; P) m- r6 ^% w" p

* @0 @! c4 T! @$ p' x经过转染的DC回输人体后其安全性如何呢？

lunyuyuanxj

回复 zuming 的帖子
. U% g/ V% V8 d+ z! A7 }0 e8 g* P$ |
感觉得出你对这方面的研究比较多！有人用冻融的肿瘤细胞进行负载，不知道用来自于不同种类肿瘤的细胞系冻融后致敏细胞是否可行？