求助关于人骨髓间充质干细胞培养方法

sunjianhua2000

我做的人骨髓间充质干细胞用的一下方法，但还有些细节不是很确定，请有经验的大侠给与指点:
/ a4 j' W2 s( z1 骨髓原液加等量PBS混匀、离心600g/10min，洗涤去上清; T1 }4 R+ K  _  X& L+ i! T$ c+ E
2 加等量PBS混匀，缓慢冲入FICOLL中，比例为骨髓稀释液：FI=2:1，900g/30min，离心，吸取白膜层
- }1 Y+ }" Y/ x5 I- k3 加少量DMEM混匀，600g/10min去上清，将细胞悬于DMEM中，接种皿，放培养箱培养。' w6 n* C. G0 l  S
4 三天后，全量换液。- J/ {7 ]. w$ Z5 Z& C2 }. u
3 w; [: l+ _9 H! ~* n9 D' r
三天换液时，因怕反复冲洗冲掉MSC，我只是将PBS倒入培养皿中，然后晃了晃培养皿然后就将PBS吸走了，只洗涤了一次就换液了，此时这步骤是否正确，是否需要充分洗涤三次再进行换液？
1 O2 n5 ^, y# _. o  c/ Z1 L还有以上的细节那部分会有不妥，也请各位大侠给与指点。非常感谢！

camus

MARK一下，学习学习

dimi_luki

学习一下，最近开始做人的间充质干细胞了。。

wcforever126

回复 sunjianhua2000 的帖子
. A: G% S) h1 ?  o
2 q/ ?# A6 H6 U% [您好，您用的FICOLL是多少密度？
5 T5 n& P5 k" i! F% @

wcforever126

回复 dimi_luki 的帖子7 k) U, u% C# m
5 i( s7 U1 t! z, F
您好，想请教您些问题，小弟最近开始做人骨髓间充质干细胞这方面的，从提取这步开始做的就不是很顺利，麻烦您看下我的步骤有没有问题，谢谢。
% t+ b# ]3 B2 y) k$ X- p, C" R麻烦看下小弟提取步骤有没有问题：骨髓：生理盐水=1:1，Ficoll-Paque PREMIUM（密度1.077）：稀释后骨髓标本=1:1，离心2000转，15分，20度，最大加减速4/3，中间白膜用生理盐水稀释至10ml，1500转，4度，8分钟，最大加减速4/4，重复2次，加培养基。$ J. U* D' x: R+ o; O
可不可以把您的步骤及注意事项发给我，我邮箱823293603@qq.com，谢谢。

liuyul03

很多人在用全骨髓贴壁法，效果也很好啊。9 X1 n1 F' J; `) ]( y# m/ v

liuyul03

很多人在用全骨髓贴壁法，效果也很好啊。. y' W7 c" [  r& T; g