求助关于人骨髓间充质干细胞培养方法

sunjianhua2000

我做的人骨髓间充质干细胞用的一下方法，但还有些细节不是很确定，请有经验的大侠给与指点:
( i- c9 |  }- }7 l1 骨髓原液加等量PBS混匀、离心600g/10min，洗涤去上清
6 A" n" b% x7 I$ z8 o2 加等量PBS混匀，缓慢冲入FICOLL中，比例为骨髓稀释液：FI=2:1，900g/30min，离心，吸取白膜层) @2 C0 \& w' |+ P9 a
3 加少量DMEM混匀，600g/10min去上清，将细胞悬于DMEM中，接种皿，放培养箱培养。
. W+ v5 s; k( W( A4 三天后，全量换液。
' M& {; Z; A3 q
; o7 Q9 H/ M" ^7 [- c5 ^$ {- K三天换液时，因怕反复冲洗冲掉MSC，我只是将PBS倒入培养皿中，然后晃了晃培养皿然后就将PBS吸走了，只洗涤了一次就换液了，此时这步骤是否正确，是否需要充分洗涤三次再进行换液？0 ^( s. H# B. M
还有以上的细节那部分会有不妥，也请各位大侠给与指点。非常感谢！

camus

MARK一下，学习学习

dimi_luki

学习一下，最近开始做人的间充质干细胞了。。

wcforever126

回复 sunjianhua2000 的帖子+ W+ v- [6 `- q7 S1 o% M
7 i6 `' b/ R9 S& H4 n5 S" h$ p
您好，您用的FICOLL是多少密度？
+ Z; K" J5 @% ^9 C/ b

wcforever126

回复 dimi_luki 的帖子- t5 S. y- q2 O) E* P+ G# w3 ?9 p2 ?( S

9 E% w$ ?4 S) P# s您好，想请教您些问题，小弟最近开始做人骨髓间充质干细胞这方面的，从提取这步开始做的就不是很顺利，麻烦您看下我的步骤有没有问题，谢谢。
* M& t3 w. K* z6 y麻烦看下小弟提取步骤有没有问题：骨髓：生理盐水=1:1，Ficoll-Paque PREMIUM（密度1.077）：稀释后骨髓标本=1:1，离心2000转，15分，20度，最大加减速4/3，中间白膜用生理盐水稀释至10ml，1500转，4度，8分钟，最大加减速4/4，重复2次，加培养基。
5 @1 R% h6 @" Z可不可以把您的步骤及注意事项发给我，我邮箱823293603@qq.com，谢谢。

liuyul03

很多人在用全骨髓贴壁法，效果也很好啊。
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liuyul03

很多人在用全骨髓贴壁法，效果也很好啊。
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