错在哪一步，望赐教！------谈脐血分离MSC

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回复 camus 的帖子
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没发现有贴壁的，不知道为什么？

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回复 meister 的帖子% W8 y) l, K# F* g

# E+ s2 n5 E9 l  B6 }: [- I这周二又做了一次，干脆把脐血稀释之后直接密度梯度离心，而且离心后也见到白膜层了，但今天还是没有见到贴壁细胞

evial

白膜层放进盘子里时你有没观察过有细胞？红细胞裂解液去除红细胞后要离心沉淀才能收集到细胞啊，取得上清液哪里来的细胞？! s1 a) D% A9 w% v
要么裂解，要么梯度离心，两个方法同时都用重复了，你有没看过protocal？

joesiezhao

为什么要裂解红细胞呢？裂解后不容易分层，不易观察白膜层。 脐血间质干细胞相对来说是比较少的，你要多做几次。

evial

裂解了就不要去分层，不会有分层，上清都是不要的东西，沉淀下来的才是你要的东西，你把孩子当垃圾倒了，当然后来就没有孩子养的出来了

wind789

回复 542177563 的帖子# X& s, B- m2 @2 W& C

4 X" O. n$ D3 I/ p0 h. R; V. w我们也正在摸索脐血MSC，推荐一篇文章给你。共同加油！

henryjia

首先，RBC裂解没有必要；直接梯度离心以缩短离体时间；再者，长出细胞克隆一般要8-10天，耐心，淡定。
5 K4 K$ d# j5 Q; w
$ A0 P4 T& |: W! M* ^+ h如果用EGM2培养液提取EPC是一定可以的，脐血EPC比MSC多多了。千万要注意一个问题就是不要因为担心其他细胞污染，就过于频繁换培养液。
7 S8 x& Y0 f& l  C% b" b
9 V7 ]* Z" u% y" E4 L& _" V  b祝好运。

Roden

回复 542177563 的帖子6 Q2 n: N8 t$ p# a
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脐血间充质的成功率大概在20%~30%，楼主可以一气儿多养几个。( j0 Q4 y1 W4 n* S6 l0 B8 h% W4 V
贴壁细胞呈集落的速度与细胞自身和培养环境都有关系，不知今天爬出来否？

542177563

回复 henryjia 的帖子  Z5 C7 {7 F/ U) [

1 i2 S9 C/ ?5 U养EPC是不是一定要铺层？我一般用的是培养瓶，听说瓶底一般有铺层，有时最多用多聚赖氨酸铺一下罢了！这对培养出EPC细胞的影响大吗？

henryjia

回复 542177563 的帖子2 V5 J) @. \" d/ J+ I9 w7 s
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建议铺层，但是我确实实验过不铺层，也一样能长。