错在哪一步，望赐教！------谈脐血分离MSC

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没发现有贴壁的，不知道为什么？

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这周二又做了一次，干脆把脐血稀释之后直接密度梯度离心，而且离心后也见到白膜层了，但今天还是没有见到贴壁细胞

evial

白膜层放进盘子里时你有没观察过有细胞？红细胞裂解液去除红细胞后要离心沉淀才能收集到细胞啊，取得上清液哪里来的细胞？
* u9 p3 J2 R3 K9 l7 k! O: \要么裂解，要么梯度离心，两个方法同时都用重复了，你有没看过protocal？

joesiezhao

为什么要裂解红细胞呢？裂解后不容易分层，不易观察白膜层。 脐血间质干细胞相对来说是比较少的，你要多做几次。

evial

裂解了就不要去分层，不会有分层，上清都是不要的东西，沉淀下来的才是你要的东西，你把孩子当垃圾倒了，当然后来就没有孩子养的出来了

wind789

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1 ]/ |% i2 u6 u/ [% ]* Y8 W
' h, M4 W' A6 K7 x' Q& i" t. O我们也正在摸索脐血MSC，推荐一篇文章给你。共同加油！

henryjia

首先，RBC裂解没有必要；直接梯度离心以缩短离体时间；再者，长出细胞克隆一般要8-10天，耐心，淡定。
* u6 i. Z2 q% \3 \0 G7 l" V. v* P! B. e" K1 d
如果用EGM2培养液提取EPC是一定可以的，脐血EPC比MSC多多了。千万要注意一个问题就是不要因为担心其他细胞污染，就过于频繁换培养液。, Q# u1 Z3 f( w; ?2 K: U

, R( D4 [& B/ V祝好运。

Roden

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0 j8 k4 f. }0 ?# m% J2 L0 Q, y% n7 n) G  L% \5 i
脐血间充质的成功率大概在20%~30%，楼主可以一气儿多养几个。) B% |3 {  X2 d3 n  x4 c
贴壁细胞呈集落的速度与细胞自身和培养环境都有关系，不知今天爬出来否？

542177563

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$ e. z% r+ T8 D- q* L' g
" S2 ?' Y+ N% U养EPC是不是一定要铺层？我一般用的是培养瓶，听说瓶底一般有铺层，有时最多用多聚赖氨酸铺一下罢了！这对培养出EPC细胞的影响大吗？

henryjia

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建议铺层，但是我确实实验过不铺层，也一样能长。