细胞模型构建

linzi214

各位朋友好！有没有人或者实验室在MHCC97系列细胞中成功构建高表达细胞模型？我们实验室用来pBabe-puro、pBabe-Neo两种载体，磷酸钙转染和Fugene两种方法，不同的操作人员来构建稳定高表达细胞模型，但是细胞在感染病毒后一个月内，细胞增殖缓慢或者不增殖，细胞慢慢变大呈扁平鸡蛋饼状，然后慢慢失贴壁溶解，加入药物筛选或者不加药物筛选，细胞都活不过1个月。请问哪位在这个细胞系列成功构建细胞模型的大侠指教一下？十分感谢！！！

yqbter

这个细胞有个最大的问题是密度低，就会慢慢死亡，这样不利于筛选！所以，做稳定转染难度系数会很大的！

linzi214

嗯，是，这个细胞必需留多细胞传代才好。我们的方法是靶细胞感染两轮共4次，在筛选的时候是将感染后60mm皿的细胞尽量养的多一点，然后全部转进100mm皿中进行筛选，密度~40%，但是这样细胞状态都不好。只能筛选一次，即使不筛选，细胞生长速度也是越来越慢，最后变大失贴壁。看文献是瞬转的。不知道成功构建这个系列细胞模型的人有没有好的指导意见？