我养的脐带间充质干细胞表型检测怎么CD105表达成阴性啊？

meister

有阳性对照吗， 是抗体的问题吗？

owenlion

CD73 、CD90、CD34、CD45有没有表达？ CD105不可能一点都没有， 方法存在问题或者细胞来源有问题

dwl1209

如果其它都表达正常，而你的细胞形态什么的基本上可以确定没问题的话，做了几次都阴性那就应该是抗体的问题了。关于胰酶，一般都是洗洗就可以了吧，好像木有人检测……个人认为使用细胞刮刀技术得很好

笨笨的图图

使用细胞刮收集细胞，对细胞损伤较大，但是不会造成CD105缺失。根据楼主的描述，除去你的胰蛋白酶的质量问题，就是你的消化时间太长了，消化过了，我们实验室出现过这种情况~

hwlightning

回复 owenlion 的帖子, B0 z$ V! w5 C/ n4 s& T- b3 p& O) ~

/ {% {- Q2 g8 c  ~& n表达CD73 、CD90* d3 ~5 e8 ~+ m+ U
不表达CD34、CD45, `2 r* m8 ?) j, l6 Y, H
就是不表达CD105，是不是细胞不纯，不纯的话怎么其它表型又是可以的？
3 x/ a9 o/ G$ g" S1 q细胞来源是脐带

hwlightning

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1 |5 ~* o! d: O& ?) ^6 y
% N, [. N0 n' K% j6 }( P! ]$ e如果CD105一直不表达，是不是可以证明这个细胞不是HUMSC？

hwlightning

回复 笨笨的图图 的帖子* h9 Q4 t8 M$ \" F; o* T1 a! {) W

% [3 J+ l! }# k% B- X: `2 o谢谢，我再试试下。

owenlion

应该可以检测出来的，你找下实验中的原因，抗体，检测过程中有没有问题，可能是些小问题。可以找几个对照做下，流式不是有标准检测颗粒的吗

dwl1209

CD105是比较公认的MSC表型，按照现在大家的判断依据，在除去其他影响因素（如抗体质量问题）的情况下，一直不表达CD105，可以判断它不是UCMSC，因为UCMSC的表型里大多文献是认可有CD105的，不过不同来源的MSC表型仍有争议，表型鉴定也只不过是一个参考而已，你能从其他途径证明它就是UCMSC，那就是一个新的声音了呵呵。至于你说的不是HUMSC，你自己的样品是什么你不知道吗？种属差异可以影响MSC生长，但表型我就不清楚了，之前看过鼠和人的HSC表型是有差别。希望对你有所帮助，有认为不对的地方继续讨论

xuning1106

mengnancy 发表于 2012-5-29 10:47
7 g) _& y9 R1 v/ ?' W5 H1 {* r再做一次流式检测，第三代细胞CD105表达应该达到99%以上。含0.25%EDTA的胰酶消化后，洗3-4次细胞。胰蛋白酶 ...

+ ]- w$ n, L& a
消化后洗3-4次，如果要传代的话，对细胞损伤和量岂不是都有影响？