IRES-EGFP可不可以放在SV40 promoter-NeoR的后面？

miRNA

IRES-EGFP可不可以放在SV40 promoter-NeoR的后面？
( [0 C: u& s4 J$ Q  b. }因为各种原因，IRES-EGFP不能放在CMV-插入片段的后面，) C) O  l8 r. S# \7 `
所以....5 S, i/ {# a7 A& u& R1 S
! v' k) m# C. l2 |% _8 S" H: o
另外，有没有这样的质粒，GFP和插入片段的启动子是分开独立的？

BenHantun

为什么IRES-EGFP不能放在后面，买的载体不就是CMV起动的目的基因后面连上IRES-EGFP吗？

BenHantun

为什么IRES-EGFP不能放在CMV后面，买的载体不就是CMV起动的目的基因后面连上IRES-EGFP吗？

wcfeng88

可以通过酶切把CMV启动子去除后，再插入你的目标片段。如果gfp和你的目的片段需要分开独立的启动子表达，你可以先用克隆载体T-vector分别构建好“启动子1+gfp”和“启动子2+目标片段”的克隆载体，然后再把它们连接起来。

zack

IRES-EGFP可不可以放在SV40 promoter-NeoR的后面:这个确实是一般公司构建载体连接元件信息的顺序，不是很明白楼主说放不了。
/ A! s+ y3 D; m4 `. b9 V8 b: r* H$ o* P. o* ~* v5 h1 i
另外，可以用2A序列连接，独立表达目的基因和报告基因。

miRNA

回复 BenHantun 的帖子8 ^. W$ ?" F; e5 H" f* e5 Y
, s4 a( y( K  s& W7 {
因为插入片段还有3'UTR，而3'UTR区里面有几个polyA位点，我担心，转录还没到IRES-EGFP就转录终止了。所以，有2个方案，一个是用2个独立的启动子，就如同wcfeng88说的那样，而如果用这个方案，CMV+目标片段+另一个启动子+GFP，我想用弱一点的启动子来启动GFP的表达，而载体本身就含有弱一点的启动子SV40(用来启动NeoR的表达)，所以，我想干脆将IRES-EGFP放在SV40-NeoR的后面，这样不就很方便吗？

miRNA

回复 zack 的帖子
. g3 B: k: H0 N0 i" b
: |9 ], n' c) _( U% d什么是2A序列？

b6122

2A序列是一段特殊的序列，在翻译的时候会自动断掉，于是1个mRNA就会生成几个独立的蛋白质

POPOLD

xuexi学习了

miRNA

回复 b6122 的帖子
9 @/ u& t+ B$ N& z6 W0 T. L; `4 h
嗯，看了一下文献，确实如此，谢谢！学习了！