脐血MSC贴壁细胞传代时消化不下来，怎么回事呢？

xuning1106

首先你的原代细胞养的时间太长了，无血清的一般13天左右就可传代，血清的也就17,8天；原代养的时间太长不是太好，非常抓壁，而且就算你吹打刮下来了，你的细胞结团现象比较严重。其次细胞消化应用最短的时间（1~2min）消化时间越长，细胞的活性会降低，细胞的老化的非常严重；细胞在消化过程中可以适当的晃动瓶身，将细胞慢慢摇下来

hybaoyu

谢谢各位大侠的指点，我再试试

asa_ok

胰酶含EDTA吗，或者你的液体里含钙、镁离子影响了酶的消化能力？

心蕾

6 R0 x$ i* K; t' e* {' a/ \

+ P& a& x! m& ~2 V, V: P我曾经试着养脐血间充质干细胞，遇到和你同样的问题，脐血原代可以铺满瓶底，传代消化十几分钟也消化不下来，最后即使吹打下来了，传代之后全死掉了，我用的是0.25%的胰酶+0.05%的ＥＤＴＡ，用这个来消化脐带间充质干细胞，两三分钟就消化来了，胰酶绝对没有问题。前几天从一篇外文文献上看到有人用盐酸利多卡因和ＥＤＴＡ来消化脐血间充质干细胞，室温５－８ｍｉｎ就可以消化下来，还可以稳定传代，仁兄可以试试，如果有需要可以把那篇文献传给你。

hybaoyu

谢谢，请把那篇用盐酸利多卡因和ＥＤＴＡ来消化脐血间充质干细胞的文章发至hybaoyu@163.com，谢谢

心蕾

回复 hybaoyu 的帖子$ E& D$ h+ i7 z$ T" o: F

1 H( [0 l& s. L. H2 @! o3 ]( R可以参考一下里面的消化方法试试

湖南干细胞

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0 o' z0 o# V! j5 Y
( N- ^. U/ ], P+ t) x& t5 Q& u0 U8 ]$ @求教：我看到丁香园上都是说二三十天才第一次传代，都是误导？还是与培养基有关？我养的细胞6天就死了，用原代培养基只用了含2mmol/L左旋谷氨酰胺的DMEM/F12+10%胎牛血清，请问是培养基的问题吗？还要添加些成分吗？首次换液时间第几天比较好？以后是7天换液一次还是3天换液一次？因为是新手，有些啰嗦，见谅。

xuzhijuan1989

请问你的细胞是纯的MSC吗？还是有杂细胞

弑之使徒

细胞太老了吧！我们有时做的都是这样老的就消化不下来的...........

细胞海洋

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