脐血MSC贴壁细胞传代时消化不下来，怎么回事呢？

hybaoyu

我的脐带血MSC在传代时用PBS洗了两遍以后加0.25%胰酶.EDTA，放在37°C温箱十几分钟也没有消化下来，只有通过反复吹打近半小时才下来的。胰酶.EDTA是刚买的，Gibco，第一次用呢。不知怎么回事？恳请各位大侠给予指点！

yongchen1314

我的经验来看MSC在你这个浓度胰酶下，消化这么久都会死的，正常情况下2min左右就可以吹下了，估计是胰酶的问题

daytoday

如果你的胰酶消化别的细胞很快就下来了，那就不是胰酶的问题
3 r( F/ Y, y" F* |; U* O; L是脐带血MSC发生分化了

hybaoyu

那是不是我早点传代会好点啊？

hybaoyu

按照文献上说30天左右传代，我是23天就传代了的呀

学无止境

hybaoyu 发表于 2012-6-6 08:08
0 E5 h2 F& \  N- ~按照文献上说30天左右传代，我是23天就传代了的呀

  e3 K+ g& \  ?% |
怎么会那晚传呢，实际培养过程中 原代最早的有一周的，大多数一般都是15天左右传的，放30天估计长出来的细胞形态也不会好到哪儿去的。你23天传，时间也不短啊. k8 ?+ x3 h1 E- w; W+ K8 D9 ?& e6 I

maoxindong

我养的脐血MSC一般在十天就长出来了再长四五天就可以传代了。23的话有点晚，30天的话就太晚了，形态应该有所变化

pipi168

传代时间长了，胰酶用法不当

xiaojunhu1985

支持 学无止境  的说法

hybaoyu

今天将另一份15天的传代试了一下，胰酶消化约4-5分钟，吹打近十分钟，还是有一部分细胞没有消化下来。把消化下来的细胞传代了，不知会长得怎样，期待中......