2012细胞治疗技术研讨会嘉宾演讲摘要

坤明

肖扬* `2 H7 D, C, J  Q
3 e" y5 C% A" S
间充质干细胞的免疫调解机制及临床应用# ?( f2 q" D+ }

; _, @$ x% }, s5 t
6 n. V: z( s* F7 {& o+ S6 f. A! a4 m
间充质干细胞（MSC）具有低免疫原性及向缺血或损伤组织归巢的特征,输入宿主体内后,可归巢于特定部位,在微环境影响下定向分化为内胚层、中胚层以及外胚层3个胚层来源组织的细胞,如骨、软骨、肌腱、脂肪、肝、肾、皮肤、肌肉、神经甚至胰腺等10余种成熟细胞.因而成为再生医学中器官修复的理想种子细胞。近年来研究发现除多向分化潜能外，MSC还具有较好的免疫调控作用，主要免疫调控机制为1）抑制T细胞增殖,诱导T淋巴细胞亚群由Th1、Tc1向Th2、Tc2极化；2）抑制DC细胞成熟与分化,减少DC细胞IL-12及TNF-α的分泌；3）上调CD4+CD25+FoxP3+Treg细胞,诱导免疫耐受；4）抑制细胞毒T细胞,避免或逃逸被细胞毒T细胞和NK细胞攻击。基于对其作用机制的明确及体外细胞水平和动物模型水平的研究基础，目前已有较多应用MSC于异基因造血干细胞移植后的移植物抗宿主病（GVHD）的防治；再生障碍性贫血(AA)、系统性红斑狼疮及多发性硬化等自身免疫性疾病的治疗的临床研究。2 J4 @( B# g( g" O; y

. V; ~% s" G2 e在GVHD防治方面，迄今为止在Clinical. trial 登记的临床研究有近20项；初步的结果显示了较好的安全性和有效性，可显著降低GVHD发生率，减少移植相关死亡率（TRM）,但Katarina Le Blanc于2008年发表在Lancet上的一项多中心研究提示早期预防性输注MSC也可增加白血病复发风险，目前多数研究者倾向于将MSC用于激素耐药或难治性GVHD的治疗，我们采用供者或第三方来源的的骨髓MSC每周一次静脉输注治疗了20例移植后GVHD患者[平均输注量:0.8 (0.23~2.1)×106/kg;平均输注次数3(1-5)次],结果治疗组总体有效率(CR+PR)达70%;且发现MSC对移植后肝脏GVHD及皮肤GVHD疗效更为显著，而并不增加疾病复发风险;另外第三方供者的MSC联合脐血干细胞输注对移植后造血恢复不良也有较大改善。
  l! \) P* G& t. [5 _; `# m0 o6 [& A4 q7 ~( t
再生障碍性贫血（AA）是一类T细胞介导的骨髓造血衰竭性疾病，目前临床除部分患者采用骨髓移植或强化免疫抑制治疗外并无更好的方法，我们的研究发现AA患者血浆及外周血CD3+,CD8+细胞内IFN-γ,TNF-α高表达；骨髓液及血清中游离TNFR1、TNFR2等负调控因子水平也较高；AA患者T细胞亚群的异常除CD4+T/CD8+T细胞；Th1/Th2细胞失衡外，还存在CD4+CD25+FoxP3+Treg表达减低；另外也发现DC1与成熟DC1的失衡可能在AA发病环节中具有重要作用。早期的动物模型研究证实了免疫细胞治疗可促进经放射造模的骨髓衰竭小鼠造血恢复,并证实其机制为抑制DC细胞成熟与分化,减少DC细胞IL-12及TNF-α的分泌，体外细胞实验则证实MSC可抑制AA患者外周血T细胞增值；下调AA患者GATA-2、PPARγ表达及BMNC凋亡率；上调AA患者外周血CD4+CD25+FoxP3+Treg的表达；经总结我们在Clinical trial 登记的关于MSC治疗AA的前瞻性多中心的临床研究，25例的初步结果显示：BMSC输注射治疗AA可上调其Treg水平，与传统IST相比，总有效率更高，安全性好，长期疗效及不同类型AA的疗效差异有待扩大病例数进一步研究。8 l+ u( L& H4 M1 A" E
* K0 c( q$ b& j- O2 U7 }8 i8 q0 T
MSC对其它自身免疫性疾病如多发性硬化也有较好的疗效，小样本的临床研究与传统激素治疗相比，MSC治疗可减少疾病复发，无明显毒副作用。' B  D, d  e3 f5 \( ~+ q

( R; w8 A' m: w" [) A总之，由于MSC与T、B淋巴细胞、NK细胞、DC细存在交互作用的免疫调控作用，其在白血病移植后GVHD、AA、多发性硬化等自身免疫性疾病方面有较大应用前景，值得进一步深入研究。7 e& B* R# V' t
, U% {/ J$ C. C" B8 B! h

坤明

8 B; m' H( w/ M: W( G/ b2 ?+ v0 j
% y% W3 K. ^: `: r# W
陈嘉榆
3 ?( x6 @+ W0 o, E3 U& B- i
1 |" u" @9 @. e: R% p3 N8 ^$ `1 w骨髓间充质干细胞治疗矽肺的基础与临床研究
2 E5 E1 E2 p( L2 u/ |
; [" V) t; |* O' J矽肺是最常见职业病之一，在我国10类115种职业病中，矽肺的发病率最高，危害最严重，死亡率也居首位，亦称为隐性矿难。目前治疗只有改善症状的作用，但不能解决根本问题--肺纤维化。本项目主要是探索矽肺靶向基因治疗的可行性。通过比较石英尘和博来霉素诱导的大鼠肺纤维化模型，我们发现，1.共同点：两种模型的肺泡炎和肺纤维化程度均随时间逐渐变的更严重，最终结局均为肺组织纤维化。2.不同点：BLM组14d时肺纤维化最严重，而SiO2组7d时纤维化与对照组同期相比无统计学意义。 免疫组化显示TNF-α表达量在BLM组7d时最高，在14d时SiO2组高于BLM组；CD68表达量在SiO2组14d时最高，在BLM组7d时低于本组14d时，低于SiO2组同期。TNF-α和CD68表达量在SiO2、BLM两组各时段均较对照组高。在动物研究基础上，我们做了初步临床研究。2008年10月至2010年5月对10例矽肺患者采用自体BMSCs移植治疗，其中7例患者采用单独自体BMSC移植治疗，3例患者（Ⅱ期1例，I期2例）采用肝细胞生长因子（Hepatocyte growth factor,HGF）基因修饰的自体BMSCs治疗。结果：1.临床症状改善情况：治疗后观察患者6～9个月，所有患者咳嗽、咳痰、胸闷、气紧等呼吸系统症状基本消失。2．血清CP和IgG水平的变化：治疗后血清CP和IgG水平下降明显，与治疗前比较差异有显著性意义。3．T细胞亚群变化：治疗后T细胞亚群变化与治疗前比较差异无显著性。4．肺通气功能变化：治疗后FVC、FEVl.0有明显增加，与治疗前相比差异有显著性。思考与展望：1. 通过内源的、外源的甚至经过基因修饰的干细胞使组织再生，是一个很有前途的新的治疗方法；2. 矽肺的发病机制非常复杂，故其治疗的难度很大。建议开展多环节的防治合作。4 U. U: _" d) O9 }) v& X, S) U
' \2 D: ?( H" O; \( D8 n

坤明

杨晓凤
' }' i  |: U5 J5 ^  {$ p+ n% T% x5 o* ]( b) O
干细胞改善股骨头坏死缺血状态的研究* A1 |; E9 J3 N$ ^& O, u+ @

$ L0 c& L& [0 _, q
: u, y: l2 P% g5 H$ Q# q1 I" p" h" m4 z: r. [
输注改善股骨头坏死缺血状态的机理和疗效。方法（1）动物实验：2004年1月～2004年6月采用液氮冷冻股骨头缺血性坏死模型建立方法，双后肢股骨头均制作缺血模型，右侧为移植组，左侧为对照组。抽取骨髓，将所获单个核细胞经右股动脉注入；同法将生理盐水注入左侧股动脉内。（2）临床研究：2004年7月～2011年6月265例成人缺血性股骨头坏死（ANFH）患者接受自体BMSC和PBSC治疗，按国际分期标准（ARCO）分期，设自身前后对照方法进行疗效观察。BMSC组107例和PBSC组158例在DSA下行超选择性股骨头供血动脉干细胞输注，第3、6、12、24个月进行髋关节Harris评分做疗效评价，6个月复查股骨头供血动脉造影观察血管新生情况。每间隔6个月复查影象学变化。结果（1）动物实验结果：①20只兔均进入结果分析。②DSA动脉造影结果：移植后4周移植组兔右后肢股骨头区供血动脉较对照组股动脉明显增多。③病理结果：移植后12周右侧股骨头软骨、板层骨及骨小梁明显修复，左侧股骨头坏死无改善。（2）临床研究结果：①265例患者随访6～64个月（平均38.2个月），髋关节疼痛缓解226例（85.1%），关节功能改善164例（62.0%），196例（73.9%）行走间距延长。②影像学检查：干细胞治疗后6个月58例患者行股骨头供血动脉造影检查，显示供血动脉较移植前明显增多、增粗，血流速度增快； 12～24个月121例患者XP、CT、CRI检查结果示股骨头缺血坏死病变无进展或改善。③BMSC组和PBSC组疗效对照结果无显著差异，但PBSC组患者依从性好于BMSC组。结论 干细胞改善ANFH缺血状态经过三个阶段：第一阶段是治疗后1～21天为细胞因子分泌期，可使髋关节疼痛得到暂时缓解；第二阶段是治疗后3～6个月为血管新生期，在缺血的股骨头区形成新生血管网络，使临床症状得到持续改善。第三阶段是治疗后12～24个月为骨新生期，股骨头发生组织学变化，使病情进一步好转或痊愈，配对t检验干细胞移植术后与术前Harris评分总分对照，髋关节功能改善有极显著意义（p﹤0.01）。
) |2 [4 J4 i* W( Z" e4 a8 }# Z6 {. j5 l- O
本项研究结果表明干细胞治疗ANFH的适应症为国际分期Ⅰ～Ⅲ期初患者，如股骨头明显塌陷、变形效果不佳，应考虑外科手术治疗。影响干细胞移植疗效的主要因素有（1）干细胞的数量和质量；（2）干细胞移植的时间和路径；（3）患者自身影响干细胞存活和分化的因素（目前尚未明确）。尚有一些问题需要解决，如干细胞治疗的最佳时机、干细胞在缺血组织内的旁分泌作用和增殖分化潜能、新生血管再狭窄预防等，均有待进一步研究。经动脉干细胞输注治疗ANFH方法简便，安全有效，对缺血病变的股骨头无再次损伤, 患者依从性好，在治疗中未发生不良反应，为缺血性股骨头坏死患者提供了一种新方法。
. U2 h2 x0 Q* Z; G7 u. X/ ^
1 ^2 J1 S  |: W

坤明

项春生* A- c- ?3 ]! z5 Q$ G

; h7 l* b: o/ h4 S宫内膜干细胞诱导肝样细胞及其应用潜能
# o' V. _( [. x6 z2 ]% o
* r8 @  M/ b: d: Q. m# a
4 |- _" N' @* |5 x2 O
, Q' \" K% A2 w原位肝移植是治疗终末期肝病的金标准。由于肝源的短缺，费用的昂贵以及移植后的免疫排斥反应限制了其的临床应用。肝干细胞移植显示了很好的前景，但是，无法获得足够数量活体肝组织使用于移植的细胞达不到有效治疗的效果。近些年，其他组织来源的干细胞移植用于替代肝脏移植和肝干细胞移植发挥了积极的作用。大量研究显示间充质干细胞具有多向分化的潜能，能够在体外诱导分化为肝脏细胞，并且在肝损伤动物模型中可以修复损伤的肝脏细胞并且能在一定程度上恢复肝功能。
; I6 L6 B8 v& W  f. c
5 F$ \7 [1 ~4 P* y: p3 B  y宫内膜干细胞是新近发现的间充质干细胞，符合间充质干细胞的一般标准，在体外可以稳定增殖而不发生核型的改变，具有免疫原性低，无致瘤性的特点，在体外可以诱导分化为多系细胞。本研究利用宫内膜干细胞在肝脏特异性选择培养基中培养3周，使其分化为较成熟的肝细胞，首先将这些细胞移植到肝脏部分切除小鼠体内，10天后发现肝脏部分切除小鼠肝功能较对照组有明显的恢复，8周后免疫组化检测发现移植细胞仍存在于小鼠肝脏中；为验证这些细胞是否具有肝脏重建功能，我们选取Fah-/-小鼠进行细胞移植。结果显示，移植细胞可以随血流迁移至小鼠肝脏，并在小鼠肝脏内达到一定程度的重建。所以，我们认为，宫内膜干细胞及其来源的细胞在肝脏疾病治疗中可以发挥一定作用。  f& Q: H+ p' y

9 l% {* E% l0 G" N* x# |8 Q

坤明

欧阳宏伟* A+ d  b& h& X. [

3 {8 g3 ^" R. v+ A7 d) I9 P) s+ @运动系统的再生治疗
) A9 t3 p3 d! i# J3 `2 ]7 f5 V$ Q5 g% T7 l' N1 I1 @" [' W

" O( H0 _# N& G/ L
( l6 N& }# T5 R- N运动系统损伤和疾病发生率很高，所导致的病残成为社会医疗消耗的最大原因之一。美国因此开展了骨关节十年计划。运动系统中目前依靠手术和药物还不能良好治疗的疾病尚有许多。如骨折不愈合、关节软骨损伤、肌腱炎、半月板损伤等等。本讲座主要涵盖目前运动系统的再生治疗进展，以及在我国该领域的一些规范，临床转化途径和浙江大学临床应用进展。3 Q: j4 k) k) D/ ]

5 B6 {2 H- Q. M

坤明

朱大淼
% O' v' p% ?. w4 n  s# q
& i$ A5 Z- w+ y) m& j细胞治疗中的C2B2C--高质量临床研究设计与成果转化0 ~' g) ~: s- R9 e, I

9 N$ ?/ L0 h; V" c6 Q- h
) D% Y# V' f- D! L3 P$ |; Y! ~, k. E  b* l
在细胞治疗领域，中国的临床是处于国际前列的，但同样问题很多。包括缺少统一的标准，国际认可度不是太高等等，其中关键原因在于临床研究不充分，未能将优秀的临床成果转变成国际认可的规范。无论是CIK治疗还是干细胞的临床应用，中国都是国际的先行者和重要推广者，但是却往往并不是最终决策者。我们通过分析发现，虽然国内CIK和干细胞治疗应用十分广泛，但是高质量的临床成果在国际上发表相对较少。因此，迫切需要提升规范的临床研究理念，将临床研究迅速转化为高质量临床成果，提升中国的细胞治疗在国际的地位，参与推动细胞治疗的更规范、更有效地应用。这里主要涉及国内临床科研工作者在临床研究过程中的常见问题，以及从临床设计和创新性挖掘角度，设计高质量临床研究，以及如何有效的将临床资料转化为高质量的临床成果。同时，用大量典型的案例和MedSci独创的3-D design模型，挖掘临床创新点，方便的设计临床课题。
# `4 G" `2 E7 M4 Q: Y( N* a; R" O" k
我们认为，临床成果转化，一般是从临床中发现问题，然后进行规范的科学研究，最终解决临床问题，这一套方案一般称为From Clinic to Bench to Clinic的过程，也可以称为转化医学。MedSci通过教育与培训等方式，从临床研究课题的设计与规划开始，全程协助，直至高质量临床成果的转化。
- p4 S9 z* H0 o
: O! q: I) w* f' R- ^) }: m

坤明

张晓英/ C" x/ ]! z; u# S% E9 C- h
6 x- l+ c, K7 u- |/ E
神经干细胞移植治疗帕金森病安全性和有效性初步探讨; L( y8 b# a+ e; N

! X9 V, N0 ]$ x0 l# O8 E* U9 J, g0 Q+ F, G& H! x
6 g. `! W% p( a5 _# m! E
帕金森病(Parkinson's Disease, PD)是中老年常见的中枢神经系统变性疾病,主要表现为肌强直、运动迟缓、静止性震颤及姿势步态异常等。病理上表现为黑质致密部的多巴胺能神经元变性、缺失和路易小体形成。
: d: [; r6 _# X2 O& G2 C  F
4 g8 L3 D0 x# Y4 j6 K经典的药物治疗和手术治疗也只是对症疗法,不能阻止患者中脑黑质多巴胺能神经元变性的进程,因此移植不失成为治疗帕金森病的有效方法之一。既往曾利用胚胎移植、肾上腺髓质嗜铬细胞移植、颈上交感神经节或PC12细胞移植[1]治疗帕金森病,但其效果均不理想。神经干细胞(Neural stem cell, NSC)是一种在特定条件下具有多向分化、自我复制及高度增殖能力的未分化或低分化细胞,是能够向特定的神经元或神经胶质细胞分化的细胞总称。神经干细胞表面的特异性标志包括巢蛋白和RC1抗原等,而巢蛋白是鉴别神经干细胞的主要标志。神经干细胞治疗帕金森病的潜在优势 就帕金森病本身而言主要是由于中脑多巴胺能神经元选择性的发生变性、坏死,其发病部位局限而明确,并且有成功而稳定的动物模型。就免疫排斥方面,由于血脑屏障的存在,使得淋巴细胞难以进入脑内,可避免异基因甚至异种神经干细胞移植导致的免疫排斥反应。, z( e6 [+ E1 C* j) H% d" u* a
- N4 k# `- ?; a7 M8 A  _* g
试验目的：
+ z# h, I) `7 G) C
* m, n6 y6 K; o, z; _8 F- t3 U研究原发帕金森病患者应用神经干细胞移植治疗的安全性。
! f  u4 u6 X4 k2 M5 ?4 p/ r$ F7 w9 w1 Q* [2 ^+ s
研究原发帕金森病患者应用神经干细胞移植治疗的有效性。# R9 A4 f- R5 z( p8 m4 g+ Q4 t

' l0 Q9 z& X+ y试验设计：
% [7 t  R; q. U  S
; e$ n( w: ^0 i& m开放、平行、(前后)对照临床试验。
% d1 }8 z  I# E! N5 i+ _& o& h9 t7 y1 x! z3 m
PD诊断标准：根据《2006原发性PD诊断标准》。
; Y* O) }* q: C7 n( ]8 i! d$ h6 n( `; ^7 N- H
纳入标准：' ]- Z* w1 B% Q. ^6 B- f  \# v

+ r5 B1 y" c4 f; {9 i* G4 J(1)原发性PD病人。' {  e8 N3 F' `8 \4 W/ P9 }

3 t  V; U6 c; \  b- L0 ^" q% v(2)年龄≥55岁。0 V# S* y! w5 I4 {6 L4 [0 L2 O0 x) P

& ?: [  `# s/ P" t排除标准：  b- {" _4 F$ V+ ^8 i

4 c. q! N! `1 |+ v" E1.严重心、肺、肾功能不全、血液病) z7 W0 w" _; r
4 b# ^: v) e- q6 k6 l, L' g& k, w/ v
2.重症感染
& W" H5 d  G3 H$ ^
# \5 a' L$ V* A* C) v3.恶性肿瘤
7 t/ A/ i7 B( O" z8 v+ N; h+ h* X# @% o7 _3 X
4.帕金森综合征
! {0 O: W+ _  l' i  Y7 z. H  X) y8 g
5.操作部位不允许
, r" o( X3 j% g2 L
% }$ k0 I0 r0 r本课题观察病例数87例。3 o0 I  D! N% ~6 |) }! X

0 `0 y3 P5 v. m4 H1 Z% G治疗方案5 d" l: b1 g& s  `6 d

" L6 Q  R8 o4 ~0 d2 G. YA 神经干细胞移植前（或药物治疗）( \4 S7 t  O. m) O

- v6 L# Q" |2 N6 U; p: d7 mB 神经干细胞移植后
- E* {% M; U/ E( }! c" v" w* I* L, q
* d; J) ]$ p) Z0 f( b神经干细胞5×106 或 2× 107+ 多能干细胞混悬液 50ml（含0.5 × 108多能干细胞）， 1次／周，共3次。
8 |0 ]$ B$ D& p0 ]  U9 t. l# p) p1 p" a+ _4 v' X, Y
有效性指标：临床表现：震颤、强直、步态、表情缓解。统一的帕金森病评定量表UPDRS、 PD修正Hoehn-Yahr，分级量表变化。
5 x  H- `) B! u) C& u) [
$ ~2 }4 ^! n2 t2 r( [安全性指标：不良反应、血尿常规、肝功、肾功、心电、胸片、头部 MRI 、颈部血管超声（治疗前后）、致病性、致瘤性、严重不良反应（移植后1、3、6、12、24 月评价）。
  W1 b* x" Q* n5 I9 \6 E
) I% r5 N) W7 e; b1 @观察3年。  d' p( t+ h/ F! s- j2 K* ?0 F% p, Y

2 m. U3 ~# c% c9 |4 F. V2 t结果：明显改善PD病人的运动障碍症状（尤其对震颤缓解明显），提高病人的生活能力，精神、行为和情绪得到改善。
1 v$ h* b( t" D1 Q. o& W: \( }" S. P2 R$ I5 p
本组病例，19例患者出现发热、头痛，对症处置1～2天，恢复正常。无1例发生严重不良反应，随访3年，无任何不适和后遗症。治疗前后血生化检查无异常改变。$ |# i& o" V, o# [$ }
& h2 }  I8 N7 l8 @
展望：. J  B8 ^5 I5 M) z

0 `! v, Z, j8 M大样本多中心随机对照试验进一步验证疗效及相关影响因素。
8 X* A" q1 m) I  q' P, ^8 R2 c% A6 _: q+ [9 p
长期随访进一步评估神经干细胞移植治疗PD的有效性和安全性。
. U" M6 e! J" ?) F: E0 z' P! y6 d& ?5 E! m
制定综合方案、探索干细胞移植最佳途径和最佳细胞数量、移植次数、疗程等。# R0 |6 y5 D, ?8 _
: E2 d" v1 `# ~) U9 }

坤明

董小岩
& v# A6 {& }4 a/ a
- p% Z" V$ h7 R3 t0 E' U细胞microRNA活性谱指纹在细胞身份识别中的应用
# t# q  z* C. ~  T) I9 w( o3 e
* E9 Z% {8 J5 y) D6 L1 N) C6 `3 R7 Q4 Z) Z: X/ J8 ]6 c

2 R6 M- l! `& u$ v2 A高通量的miRNA活性谱检测方法的建立及应用于细胞身份的识别。建立了一种基于AAV（Adeno-associated virus）载体的高通量miRNA活性谱检测方法miRNA Asensor array。miRNA Asensor array由多种miRNA Asensor阵列包被于细胞培养板上制备而成。利用AAV病毒的反向感染技术可以方便地实现miRNA的活性谱检测。每个miRNA Asensor均包含miRNA活性检测单元和内参单元，且两个单元之间被绝缘子序列间隔，降低相互影响。利用microRNA抑制基因表达的原理，在分泌型荧光素酶基因Gluc（Gaussia luciferase）的3'UTR(Untranslated region)插入miRNA完全互补的靶序列，构成miRNA的活性检测元件单元。内参单元为Fluc基因表达框。Fluc表达水平用于指示miRNA Asensor的感染效率。用转导系数校正不同miRNA Asensors感染效率差异对Gluc表达水平的影响。用转导系数校正后的control Asensor（不携带miRNA靶序列，其余结构与miRNA Asensor完全相同）的Gluc表达水平与校正后的miRNA Asenspr的Gluc表达水平的比值来表示miRNA活性。以HEK293为例，通过检测其let7家族、miR17-92 cluster和miR221/222 cluster活性与表达水平的关系，验证了miRNA Asensor array方法的有效性。应用miRNA Asensor array检测了多种细胞（BHK21、Huh7/CD81、HepG2、C2C12、Vero、U937、K562、BEAS-2B、HelaS3、HEK293和HEK293T及其它多种细胞）的miRNA活性谱，发现了各相应细胞的miRNA活性谱指纹。进一步比较了HEK293和HEK293T的活性谱差异，发现SV40大T抗原在对293细胞进行基因修饰后，HEK293T活性谱指纹的变化（miR-21活性下降）。同时比较了TPA诱导前后K562活性谱指纹的变化。我们的实验结果显示，miRNA Asensor array是一种简单、快速和方便的高通量miRNA活性谱检测方法，其在细胞的身份鉴别中具有重要的应用前景，并可方便应用于药物靶标的高通量筛选研究。3 U5 ^# J- w% z6 J8 b" ?

) s5 `2 e5 a2 s, |/ ]' V+ v9 r7 @" I7 V

坤明

. Z1 m  U' o1 P3 }
" T* l; t: y6 i0 Y; `牛新乐( d! s) M4 A: w7 O' G' ], H4 O9 h2 D
) p: Z/ X- r( ?5 o
干细胞库村对冻存技术和产品的要求
+ p  x. V1 ~! m- Z0 S; i* Y+ W, P% X
演讲探讨了生物样本尤其是干细胞长期冷冻储存所适合的储藏温度、冷冻技术、以及相关产品（设备、耗材、试剂），并对目前干细胞冷冻保存中一些有待进一步完善的做法提出建议以及相应的产品解决方案。
, H! {, y. m3 Z& q) F
- y# k$ @2 L8 n" f- q+ c
) Z7 E/ |, \6 e1 S4 |; N: }' S' E. R. `

坤明

杨建军: j9 X  I+ F* \' [5 c
* F( r( ^( r* _2 u7 L, t
Low Complexity and High Efficient Method of Cell Expansion for Cell Therapy( Q' H# a+ d9 n  Y  T5 l, c

- n% S3 Z  K8 G3 P, k% @6 e- X# z2010年4月29日，FDA批准第一个自体细胞免疫治疗药物/方法PROVENGE? (Sipuleucel-T)，使细胞免疫治疗进入新的阶段。细胞治疗过程中扩增足量的病人专属细胞是一件比较令人头痛的事情。采用不锈钢罐进行细胞扩增，发酵罐清洗、消毒和验证工作相当繁琐，极易造成来源于不同病人细胞的交叉污染；采用静态透气袋进行细胞扩增，细胞生长密度低，需要20-50个透气袋进行同时培养，工作量大，成本高，易于造成污染。. r" ?' h' A0 V  X5 Q
4 t6 [% Q* u, Y; [$ z* S
本研究开发了一个简单高效的T细胞扩增方法，T细胞在WAVE生物反应器内进行灌注培养，细胞密度可达约20 × 106 c/ml，细胞活力 > 95%。经过约10天时间，在一个5L的一次性灌注用细胞培养袋内细胞总数可扩增300倍，达到6 × 1010 个活细胞。该扩增方法的另一个优点是细胞培养结束后，可通过细胞培养袋内置的7?m浮漂过滤膜(Floating Filter)进行浓缩，根据临床所需T细胞总数和体积，将细胞培养物浓缩至合适密度。Floating Filter省却了传统方法在细胞收获时的离心、重悬过程，更加省时省力，且不易污染更为安全。- h. m4 F4 p+ l+ i

9 {- }9 Q) T, ^- z3 A- l（生物谷 Bioon.com）
# O! A: W. x9 `& X3 ^$ A* T" S( C  R% R9 o" h0 ?