求鉴定大鼠骨髓间充质干细胞

ffkkk2007

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% q3 P* H/ f: e诸位前辈，我5月30日晚上提取的原代sd大鼠骨髓间充质干细胞,一只155g的大鼠，取了三个25ml培养瓶，三天后首次换液，之后每两天换液一次，用的是塑料瓶，成品dmem加13%四季青胎牛血清，双抗。今天已经是第九天了，早上刚换过液。但从细胞形态看好像没怎么长，只是比首次换液的时候细胞稍大了一些，间充质干细胞的特征不明显。# N% C6 M+ U1 X
请问下诸位前辈从照片上看我的细胞是怎么回事呢？是死了？还是根本不是骨髓间充质干细胞?或者只是单纯的没长到时候？
' l4 `. T0 h- U. A( r图片用松下zs7直接对着倒置显微镜目镜照的，质量比较差。$ p  k+ [: S1 c& ~; Q3 r8 ~6 t

ffkkk2007

对焦不对吗

zmm

你的培养体系不是很好，建议换一下。塑料瓶也分很多种，表面处理不一样。你的图片照的不是很清楚，对焦不是很好。

ffkkk2007

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2 c4 c% B1 u" L' A* k回复 zmm 的帖子4 s7 ^5 E4 \- S0 b. }* A9 g: }- q

' i# E$ M+ o3 L& z. I) Y$ _换成进口血清吗，培养体系？

doctor8848

从你的照片看，大部分形态为圆形的，这些是死细胞或者非MSC，MSC多为长菱形，从你的高倍图片似乎有少量贴壁的菱形细胞，这些有可能是，但形态不是很像。再有可能这些圆形细胞里边，有MSC但贴壁不好，这个可能和贴壁状态有关，不同材质的培养皿，coat方式，尺寸都会影响MSC的培养，所以需要多请教前辈和自我尝试。再有你的图片感觉对焦不是很好，你应该调动焦距看看能否找到长菱形细胞贴壁层。

ffkkk2007

回复 doctor8848 的帖子3 Y5 P2 e( \2 w1 d8 S
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谢谢您的指点

zmm

回复 ffkkk2007 的帖子" T- h. j! Y1 x7 V8 A8 D
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血清是一方面，还有您培养基的成分也不是很好。如果您愿意的话，我们可以赠送您点培养液您试一试。

orchard

不像是间充质干细胞啊 你用的是低糖的还是高糖的DMEM？5 E" {1 B3 z. `8 V4 m# `* K% O3 K

ffkkk2007

回复 orchard 的帖子* j- o" V0 p; r/ }% _

3 n8 e* T2 v, S6 X" Zhyclone的低糖dmem

hhxxattxs123

我原来用的是PAA和HYCLONE的低糖DMEM，也能长出间充质干细胞来，但是细胞状态不好，你用的四季青还有HYCLONE的培养基应该是严重影响了你的细胞生长，我最近换用了好的血清和培养基，细胞生长很快，贴壁也很多，我建议你换用好的血清和培养基，不要怕贵，越怕越做不好，