大鼠骨髓间充质干细胞原代第十三天，求鉴定

ffkkk2007

5月30日晚上提取的原代sd大鼠骨髓间充质干细胞,一只155g的大鼠，取了三个25ml培养瓶，三天后首次换液，之后每两天换液一次，用的是塑料瓶，成品dmem加13%四季青胎牛血清，双抗。今天已经是第13天了，早上刚换过液。从细胞形态看好像开始有些变化了，多出很多细丝一样的东西。
7 l' [0 w6 G7 X* D: V3 N1 P+ s直接对着倒置显微镜目镜照的，质量比较差。
5 T5 h5 |) T: O" o; {% }! H  c

shizhu198511

楼主的灯光好暗，光线打开一些

ffkkk2007

回复 shizhu198511 的帖子
4 Q4 }& Y8 m! a2 z  H$ O9 B8 f4 _6 A( v4 N' S$ b& k1 l
对着显微镜目镜照的，光圈已经调到最大，屋子灯也关了，iso调到400照片就花了

ffkkk2007

补充增亮图片) k2 _* D# u/ L" N; J- P

doctor8848

回复 ffkkk2007 的帖子: j& i7 I0 d8 P9 k

! B5 j: E: V* y6 V9 }) A( w  `6 K  f你的图片我前面看过的，现在有些细胞伸出小突触了，给我的感觉是你的细胞贴壁不好，贴壁不好的细胞无法判断是什么细胞，多呈现2-3极的圆形胞体，而且贴壁不好会影响到其分裂生长，这样下去估计你的细胞密度会愈来愈低。个人考虑，这里边肯定有一定比例MSCs，只是贴壁不好，根本无法判断，所以目前首要解决的是贴壁问题，建议考虑：1. 培养瓶透气性；2. 培养瓶coat方式。（我们用的是6cm，10cm的dish，为何不尝试多种培养器皿）

ffkkk2007

回复 doctor8848 的帖子3 {0 U" I9 c& @9 p& \& ^7 D- [
+ q" n1 o8 Z3 d; ^7 X/ C
多谢前辈指点。

天枰2012

好像细胞不纯，里面梭行细胞比较少，是不是细胞老化了呢？

ffkkk2007

回复 天枰2012 的帖子
# f9 N/ I- H2 }( A! b* p. P6 {3 T) b6 p8 x
会是因为种植密度不够，导致的少量间充质干细胞异常分化吗？

hhxxattxs123

回复 ffkkk2007 的帖子
2 I5 Q& W  k$ a+ _8 E7 C* C0 v: J: M8 u- h" g' E
首先我想知道你对间充质干细胞的要求，状态很好还是一般就行了，要是想要养出好的细胞，我觉得你要首先换用你的培养液和血清，GIBCO和进口的血清会好的多，我养了很长时间，这方面我就是吃了大亏了，然后就是培养方法的问题，1，全骨髓贴壁法2,24小时就换液，因为这个时候，杂细胞很多，换液后贴壁的间充质干细胞都能看得到了，是梭形的很好看的，成簇生长。其他方法我也试了，觉得，这个方法简单，效果也不错

hhxxattxs123

回复 doctor8848 的帖子
; D5 z4 d0 F' B7 ~* o8 ^! g4 z
8 T) A4 G2 H: |3 d间充质干细胞老化了，就会变的扁平了，你是怎么防止它老化呢