如何提取卵母细胞

spy529

用透明质酸酶消化完颗粒细胞后，如何清洗卵母细胞？具体方法

星移龙一

不知楼主问的是什么物种的卵母细胞。我们这做的是猪的，先用移液器将消化过的卵母细胞在T2（TCM199+2%FBS）液中洗三遍（即做三个液滴，从一个移入另一个为洗一遍），再用移卵针将卵母细胞在T2液中洗两遍。

spy529

小鼠的，但我们需要大量提取，一次大概得五、六百个卵呢，每次都一个一个的挑出来？用离心机清洗可行吗?

hcluo

小鼠，用PMSG和hCG进行超排处理，然后收集输卵管壶腹部膨大处的卵丘细胞，最后用透明质酸酶进行消化处理，在解剖纤维镜下，可以挑选出纯净的卵母细胞。不过，获取不同时期的卵母细胞需要不同的处理方式。

肖特

需要排卵前的还是排卵后的？" K2 D+ }2 r' Q0 L+ C! Q
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针刺卵巢可以取排卵前的卵母细胞，再根据直径区分不同时期。
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收集卵母细胞置于液滴中，在解剖镜下用毛细移卵针吸取干净的卵母细胞，转移到其他液滴中。只取裸露的卵母细胞的话需要轻吹以去掉颗粒细胞。: s! u3 f) T2 U* |4 ?; x
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卵母细胞较大，离心会离破，在液滴中卵母细胞很容易沉降。
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* R4 L* f) o/ P$ b2 u" E- Y" l& \熟练的话会操作快点。

wxl87

回复 肖特 的帖子' J% l0 {) Z* @, }

4 W: |% c! n: l# ~( {+ W; T这是小鼠的卵母细胞，怎么用针刺法？卵巢很小的。

肖特

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回复 wxl87 的帖子0 M# m( c3 |1 u

* D, I7 a  B- I: R/ c9 L7 `! u小鼠超排之后取完整卵巢，解剖镜下针刺比较明显的卵泡，卵丘卵母细胞复合体会释放出来

wxl87

回复 肖特 的帖子8 i7 p" Y# \1 J& ^$ ]
0 I( I) w; n; B% g: ~
这个每次大概能取到多少个卵母细胞？

spy529

小鼠的一个卵巢少的可以取十几个多的有时可达三十个
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肖特

回复 wxl87 的帖子
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超排冲输卵管每只小鼠可以取20-50或者更多个排卵后的卵母细胞。0 }4 v/ K) }( g
超排针刺每个卵巢可以取50个左右，所以每只小鼠可以取100个左右。9 R$ g" x  k, u3 h* ~! k! V

6 d, I5 r- Y( W& d' x针刺后暴露出的如果是裸卵，大多是正在闭锁的卵泡中的卵母细胞，所以这种卵母细胞状态会不太好。5 i/ C; b1 i1 D1 C6 ^& ?
4 `, D/ R; Y7 b  ?3 L& c2 ]
需要卵母细胞数量较多的话就多用几只小鼠。5 Q2 ^; U- v0 r) P, J% P
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