如何提取卵母细胞

wxl87

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thank you

moluxingke

如果是大量收集卵母细胞，可参考08年的这篇science，PTEN和卵泡发育相关的一篇文献；
- l. \- u" ?- t. O$ [! x大致方法如下：卵母细胞分离方法：
0 p( ?9 k' L( l; i* J0 u" Y1 小鼠脱颈处死，取出卵巢，在显微镜下剔除脂肪垫和多余组织。
) A8 V- u( ]3 E2 Y: y6 n2 将卵巢剪碎，然后胶原酶消化，消化过程中不断吹打振动。
, X5 q0 T6 H/ B  胶原酶溶于DMEM/F12培养基中，浓度为0.05%，培养基添加0.4%（g/ml）的BSA，100U/ml的青霉素和100ug/ml的链霉素，
0 f2 R8 |% i6 R+ o5 v- S3 大约40-60min以后，待组织消化基本完全，往消化液中加入EDTA至终浓度为40mM，然后于37℃孵育15-20min，期间不时搅拌，直到颗粒细胞以及其他细胞类型完全散开。
1 v# f3 h2 |: q: D% I( M% T" \0 k$ H2 U4 将细胞混合液洗涤一次，然后于上述不加血清的DMEM/F12培养基中培养12h，使颗粒细胞和其他细胞贴壁生长，未贴壁的卵母细胞和血细胞被聚集到上清液中，室温1000rpm离心5min，然后血红细胞经过低渗buffer出去，（含144mM NH4Cl和17Mm Tris-HCl Ph=7.2）。* t) D% t3 I/ ?& \
5 洗涤几遍以后，离心收集卵母细胞，加入裂解液裂解后，14 000rpm 离心20min，4℃，取上清测BCA法蛋白浓度，待用。% L8 T6 Q( Y- N7 K

+ p/ R3 Y+ x; E, F# u        具体方法参见：   Pradeep Reddy, et al.  Science，2008
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