如何提取卵母细胞

spy529

用透明质酸酶消化完颗粒细胞后，如何清洗卵母细胞？具体方法

星移龙一

不知楼主问的是什么物种的卵母细胞。我们这做的是猪的，先用移液器将消化过的卵母细胞在T2（TCM199+2%FBS）液中洗三遍（即做三个液滴，从一个移入另一个为洗一遍），再用移卵针将卵母细胞在T2液中洗两遍。

spy529

小鼠的，但我们需要大量提取，一次大概得五、六百个卵呢，每次都一个一个的挑出来？用离心机清洗可行吗?

hcluo

小鼠，用PMSG和hCG进行超排处理，然后收集输卵管壶腹部膨大处的卵丘细胞，最后用透明质酸酶进行消化处理，在解剖纤维镜下，可以挑选出纯净的卵母细胞。不过，获取不同时期的卵母细胞需要不同的处理方式。

肖特

需要排卵前的还是排卵后的？1 x6 z, p1 V+ j  d% w% M/ ]

1 }: v& j& `, O' N+ i& |3 y针刺卵巢可以取排卵前的卵母细胞，再根据直径区分不同时期。
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收集卵母细胞置于液滴中，在解剖镜下用毛细移卵针吸取干净的卵母细胞，转移到其他液滴中。只取裸露的卵母细胞的话需要轻吹以去掉颗粒细胞。6 k1 `8 s; V' `- q5 y, V' g( Y

0 c; P/ N, d8 H  Y; E. w" n卵母细胞较大，离心会离破，在液滴中卵母细胞很容易沉降。
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熟练的话会操作快点。

wxl87

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; ]7 w7 F4 c3 V3 d$ V& @8 s
" M4 N% o8 M' `8 q: @2 o' I这是小鼠的卵母细胞，怎么用针刺法？卵巢很小的。

肖特

- `3 Z* S9 \* j$ m) U  O- e
5 `& ]; k' {7 m
回复 wxl87 的帖子) y/ s% Z- L7 L  K

3 N, ^5 P8 j/ Y小鼠超排之后取完整卵巢，解剖镜下针刺比较明显的卵泡，卵丘卵母细胞复合体会释放出来

wxl87

回复 肖特 的帖子' N7 @* H/ B/ l9 T; r) t
9 {7 p; p$ D$ `4 n2 ~4 u4 Q
这个每次大概能取到多少个卵母细胞？

spy529

小鼠的一个卵巢少的可以取十几个多的有时可达三十个
" x( d  {, X" J

肖特

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! Y5 r2 M8 L( h1 M; k( E* f
9 Z; Q. M5 Z6 O  T: {- M% I( K超排冲输卵管每只小鼠可以取20-50或者更多个排卵后的卵母细胞。
& D8 a1 Y1 @1 g+ K* U) i  w超排针刺每个卵巢可以取50个左右，所以每只小鼠可以取100个左右。
7 ]& I( {, A( k. W) ^
, m/ S- {5 |( k. i# @' l2 z针刺后暴露出的如果是裸卵，大多是正在闭锁的卵泡中的卵母细胞，所以这种卵母细胞状态会不太好。
& z7 u, O. G3 _" P' ]0 T0 W1 \9 g# a6 T
需要卵母细胞数量较多的话就多用几只小鼠。7 \& }0 C- j3 a0 m# o

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