ips pMXs载体的检测外源表达的realtime引物

christophe

06年yamanaka第一篇ips的文章的 supplemental data当中列上了检测S/K/O/M,四个因子的total和endogenous表达的RT引物，但没有列上外源表达(tg)的RT引物，请教各位哪篇文章当中有提供的吗？或者哪里能找到？ 多谢各位！

不倒翁

哥们 外源的怎么测啊 你想想

刘森泉

把CMV启动子一起设计在引物里可以检测转染有没有成功，要测外源表达只能用real-time先测总的表达量，再减去对照，就是外源表达量。或者自己设计个融合蛋白，在四个转录因子前加上一片断，这样可以。

christophe

回复 不倒翁 的帖子' q+ r2 H0 v% m0 {4 T- f0 U: Y
8 V+ Q3 g( N( V$ v) }+ Z2 ]3 {% {
你的意思是外源的测不了吗？

不倒翁

回复 christophe 的帖子
1 s/ Z# N; k' S( z  V
8 d* J) G# q1 c内源的一般是在UTR上设计引物检测 然后在CDS区设计引物检测总的 总的-内源的就是外源的了

不倒翁

回复 christophe 的帖子, w6 u6 \. M/ d% a6 `9 H
* v) O2 _% S8 L' u, z7 a
内源的一般是在UTR上设计引物检测 然后在CDS区设计引物检测总的 总的-内源的就是外源的了 要直接检测的话貌似没有办法7 x! v, @+ m! j; b- `

rainnyshine

yamanaka文章有补充材料的，引物就在那里:D

xiphias

外源的可以直接检测。在CDS以及载体下游或者 上游设计引物就行了。
/ L4 t5 U/ j+ f' R. p提供两条
: [2 B! [5 k! GPF：gacggcatcgcagcttggat
) k, j, V+ {7 |; J5 Y, N: XPR：TTATCGTCGACCACTGTGCTG3 k- A( p* f5 r) A7 u" g' C
配合你需要检测基因的CDS就行了。* j0 i2 r1 F) r; d# N/ K. K
参考文献：
4 e9 H' x2 z  f2 E/ k! T: n& QMicroRNA Cluster 302-367 Enhances Somatic Cell Reprogramming by Accelerating a Mesenchymal-to-Epithelial Transition
. @4 \, I1 P& J. Q( c5 R) q: R